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1599
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MIQE指南——RT-qPCR中的RNA質(zhì)量控制
2023-3-15
1. 如何對(duì)污染進(jìn)行監(jiān)測(cè)?RNA質(zhì)量控制分為三個(gè)部分,一是濃度,二是純度,三是完整性。對(duì)于基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō),了解物質(zhì)的起始濃度是很重要的。在比較來(lái)自不同樣本的結(jié)果時(shí),應(yīng)使用相同的樣本量。
1972
次
THz-PCR技術(shù)在法醫(yī)檢測(cè)中展現(xiàn)的應(yīng)用前景
2023-2-27
PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù),應(yīng)用十分廣泛,而THz(Tera Hertz,太赫茲)是波動(dòng)頻率單位之一,指頻率在0.1~10 THz(波長(zhǎng)為3000~30μm)范圍內(nèi)的電磁波
3926
次
MIQE指南:RT-qPCR中的定量策略詳解
2023-2-13
1. 簡(jiǎn)介MIQE (Minimum Information for Publication of Ouantitative Real-Time PCR Experiments) 指南是關(guān)于qPCR實(shí)驗(yàn)發(fā)表文章時(shí)所必需的實(shí)驗(yàn)信息提出的最低限度的標(biāo)準(zhǔn)。目的是讓作者能夠設(shè)計(jì)和
1203
次
染色質(zhì)免疫共沉淀ChIP實(shí)驗(yàn)的詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟
2023-2-10
染色質(zhì)免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP),是研究體內(nèi)蛋白質(zhì)與DNA相互作用的經(jīng)典方法。開(kāi)始 ChIP 之前要考慮三件事(1)為您的實(shí)驗(yàn)查找適合的抗體(2)優(yōu)化染色質(zhì)剪切(3)評(píng)估您
2918
次
qPCR反應(yīng)實(shí)驗(yàn)操作流程中的常見(jiàn)問(wèn)題及解答
2023-1-11
實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)(real-time PCR)也叫qPCR(Quantitave PCR),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過(guò)特定數(shù)學(xué)原理對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
1077
次
如何有效避免無(wú)處不在的PCR污染
2023-1-3
前言在PCR檢測(cè)過(guò)程中,不可否認(rèn)的是,沒(méi)有任何檢測(cè)是100%準(zhǔn)確的,比如我們可能也曾聽(tīng)過(guò)假陽(yáng)性這個(gè)名詞,那為什么會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性呢?這其實(shí)跟實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程造成的污染相關(guān),在實(shí)驗(yàn)開(kāi)展過(guò)程中,主要有
3871
次
RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄技術(shù)詳解
2022-12-27
前言RT-PCR就是逆轉(zhuǎn)錄PCR(Reverse transcription PCR)或稱(chēng)為反轉(zhuǎn)錄PCR(Reverse transcription-PCR,RT-PCR),是以RNA為材料應(yīng)用于PCR擴(kuò)增中的一種實(shí)驗(yàn)方法。首先通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄酶將總RNA或信使R
1771
次
PCR蓋緊蓋子試劑蒸發(fā)問(wèn)題詳解
2022-12-6
導(dǎo)讀在PCR實(shí)驗(yàn)中,我們加完反應(yīng)體系后,都會(huì)認(rèn)真仔細(xì)的蓋好蓋子,并反復(fù)確認(rèn)已經(jīng)蓋好了蓋子,以避免出現(xiàn)試劑蒸發(fā)的情況?墒怯袝r(shí)候我們也會(huì)有一些疑惑:明明已經(jīng)確認(rèn)蓋子蓋緊了,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,還
4419
次
熒光定量PCR對(duì)照詳解
2022-11-4
前言吾日三省吾身,定量實(shí)驗(yàn)做對(duì)照了嗎?在熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中遇到?jīng)]有曲線、曲線異常等情況,我們總是會(huì)在第一時(shí)間去看陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照的擴(kuò)增情況來(lái)分析原因。由此可見(jiàn),實(shí)驗(yàn)中做對(duì)照的重要性
2552
次
PCR耗材選擇的問(wèn)答詳解
2022-10-25
導(dǎo)讀俗話說(shuō)的好,工欲善其事,必先利其器。耗材的選擇對(duì)得到滿意的PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果至關(guān)重要。在分析PCR結(jié)果時(shí),我們往往側(cè)重于對(duì)引物、酶的濃度、溫度和時(shí)間的分析,卻忽略了PCR耗材也是影響因素之一
2271
次
多重PCR技術(shù)要點(diǎn)解析
2022-10-20
多重PCR概述多重PCR(multiplex PCR),又稱(chēng)多重引物PCR或復(fù)合PCR,它是在同一PCR反應(yīng)體系里加上二對(duì)以上引物,同時(shí)擴(kuò)增出多個(gè)核酸片段的PCR反應(yīng),其基本原理與常規(guī)PCR相同,區(qū)別在于多重PCR反應(yīng)體
2769
次
Taq酶選型三要素:擴(kuò)增效率、酶動(dòng)力、靈敏度
2022-9-5
導(dǎo)讀目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上銷(xiāo)售的熱啟動(dòng)Taq酶的品牌很多,但真正高質(zhì)量的熱啟動(dòng)Taq酶并不多,面對(duì)這么多的熱啟動(dòng)Taq酶產(chǎn)品,我們應(yīng)如何選擇?首先,選擇擴(kuò)增效率高的熱啟動(dòng)Taq酶耐受性好的Taq酶反應(yīng)體系
4560
次
qPCR體系優(yōu)化和常見(jiàn)問(wèn)題解析大全
2022-8-15
前言聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)是用于擴(kuò)增特定DNA片段的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR(以下簡(jiǎn)稱(chēng)qPCR)作為第二代PCR技術(shù),自1996年推出以來(lái),已經(jīng)廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析、病原微生物檢測(cè)、
4136
次
普通PCR引物與qPCR引物的對(duì)比與選擇詳解
2022-8-3
導(dǎo)讀說(shuō)起引物,大家都再熟悉不過(guò)了。引物,在核苷酸聚合作用的起始時(shí),可以刺激合成另一種大分子,并與反應(yīng)物以共價(jià)鍵形式連接的序列。在核酸化學(xué)中,引物是一段短的單鏈RNA或DNA片段,可結(jié)合在
4496
次
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中熒光標(biāo)記的選擇詳解
2022-7-22
熒光定量PCR技術(shù)是將常規(guī)的PCR和熒光檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合,利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,以此實(shí)現(xiàn)對(duì)初始模板的定量分析。熒光定量PCR技術(shù)作為當(dāng)今生物學(xué)研究的重要手段之一,在基礎(chǔ)科學(xué)、生
1717
次
qPCR實(shí)驗(yàn)之核酸提取MIQE明確的要點(diǎn)詳解
2022-6-22
前言MIQE是描述評(píng)估qPCR實(shí)驗(yàn)所需的最小信息,該指南是稿件投稿時(shí)需要同時(shí)提交的一個(gè)清單。通過(guò)作者提供相關(guān)的實(shí)驗(yàn)條件和實(shí)驗(yàn)特點(diǎn),審稿人可以評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)所用方法的可靠性。另外提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)所用
1384
次
qPCR實(shí)驗(yàn)中安全科學(xué)地取材操作詳解
2022-6-10
規(guī)劃一個(gè)qPCR實(shí)驗(yàn)時(shí),最先碰到的問(wèn)題就是研究目的和材料的選擇。要想做好一個(gè)qPCR實(shí)驗(yàn)首先要根據(jù)目的選好材料。以目標(biāo)為導(dǎo)向的取材研究目標(biāo)的設(shè)立是非常重要的一個(gè)起始環(huán)節(jié),所以對(duì)于樣本取材要
3571
次
如何處理實(shí)時(shí)熒光定量PCR的數(shù)據(jù)詳解
2022-6-6
實(shí)時(shí)熒光定量PCR數(shù)據(jù)中的基本概念:在整個(gè)擴(kuò)增過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)基線期,指數(shù)期,線性期和平臺(tái)期。其中在基線期和指數(shù)增長(zhǎng)期,擴(kuò)增產(chǎn)物都是以指數(shù)級(jí)增長(zhǎng),但是在基線期我們沒(méi)辦法檢測(cè);而到了線性期和
2717
次
PCR原理、PCR擴(kuò)增影響因素及預(yù)防詳解
2022-5-10
PCR簡(jiǎn)介聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)是利用一段DNA為模板,在DNA聚合酶和核苷酸底物共同參與下,將該段DNA擴(kuò)增至足夠數(shù)量,以便進(jìn)行結(jié)構(gòu)和功能分析的一種反應(yīng)。PCR擴(kuò)增原理核
6672
次
qPCR擴(kuò)增過(guò)程中影響Ct值的因素及解決辦法詳解
2022-4-27
導(dǎo)讀Ct值是熒光定量PCR重要的結(jié)果呈現(xiàn)形式,它被用于計(jì)算基因表達(dá)量差異或者基因拷貝數(shù)。那么熒光定量的Ct值多大被認(rèn)為是合理?如何保證Ct值的有效范圍呢? Ct值以及Ct值的作用:Ct值概念:也稱(chēng)
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