Nature子刊發(fā)表單個外泌體高通量多參數分析重磅文章

瀏覽次數：3806　發(fā)布日期：2016-11-17　來源：本站　本站原創(chuàng)，轉載請注明出處

越來越多的研究揭示外泌體參與幾乎所有的生理代謝過程，尤其在重大疾病的發(fā)生發(fā)展過程中扮演著重要角色，使其在臨床診斷和治療方面展現出了極具前景的研究價值。目前外泌體的檢測方法主要有掃描電子顯微鏡、納米微粒追蹤分析術（NTA）、ELISA和流式分析法等，由于通量高、用時短、操作簡單，ELISA和流式分析法是比較常用的方法。ELISA方法容易受其他可溶性抗原的干擾，而且無法知道外泌體的大小、數量等信息；流式分析法不僅可以檢測外泌體的大小、數量，而且通過特異的熒光標記可以檢測外泌體的來源，將外泌體進行分類，因此，流式分析法理論上是進行外泌體快速、高通量、多參數檢測的最優(yōu)選擇。

近日來自美國凱斯西儲大學的科學家，成功摸索出一種更適合單個外泌體快速高通量分析的超靈敏納米流式分析法。研究人員充分考慮到流式分析法易于實現快速高通量的優(yōu)點以及傳統(tǒng)流式分析外泌體的限制（檢測下限200-500nm的散射光靈敏度不適合檢測30-150nm的外泌體；熒光標記檢測背景噪音高；依賴于抗體微珠的外泌體檢測法無法分析外泌體絕對數量以及單個外泌體表型），通過借助超靈敏納米流式分析儀Apogee A50 Micro,克服以上限制因素，完美地實現了細胞系上清和人體組織外泌體的高通量多參數快速分析檢測：不僅能夠利用Apogee A50 Micro超靈敏的散射光分辨率檢測到100nm左右的外泌體，同時也利用其極佳的熒光檢測靈敏度完成單個外泌體的表面蛋白分析。這種高通量單個外泌體多參數納米流式分析法，已為樹立外泌體檢測新趨勢奠定了基礎，將為相關研究人員帶來極大的便利，也必將對重大疾病外泌體標記物的發(fā)掘過程做出卓越的貢獻。

伯齊科技近年把Apogee納米流式引入國內，北京、上海的重點單位先后購入該系統(tǒng)以作外泌體、微生物和納米材料等微顆粒應用。

圖1，超靈敏納米流式Apogee A50 Micro檢測外泌體
無熒光標記的外泌體散射光強度，與100nm的二氧化硅微球散射強度相當，提示Apogee A50 Micro僅利用散射光即可檢測到大小約100nm的單個外泌體。

圖2，MDA-MB-231和 MCF-12A細胞源性外泌體檢測
利用圖1的檢測參數設置，結合CD44熒光標記，分析MDA-MB-231和 MCF-12A細胞系CD44表達陽性外泌體的豐度差異。

圖3，超靈敏納米流式Apogee A50 Micro檢測人體血液外泌體
利用圖1的檢測參數設置，結合CD47熒光標記，分析人體血液中與乳腺癌相關的CD47表達陽性外泌體。

參考文獻：

Kibria G, Ramos EK, Lee KE, et al. A rapid, automated surface protein profiling of single circulating exosomes in human blood.[J]. Scientific reports, 2016, 6.

Apogee超靈敏納米流式分析儀簡介：

超靈敏納米流式分析儀是英國Apogee Flow廠家研發(fā)，它獨有的專行光學設計使其可檢測最小80nm的小顆粒，并擁有10nm的分辨率，使其成為市場上唯一可檢測小于100nm大小顆粒的流式細胞儀。英國Apogee Flow的技術早前廣泛為美國軍方用于戰(zhàn)場上的快速微生物檢測。繼之前北京中科院微生物所和北京計量研究所引入了Apogee超靈敏納米流式分析儀為微生物作快速流式檢測和定量，最近上海第二軍醫(yī)大學轉化醫(yī)學中心的老師也選購了Apogee最新的A50-Micro Plus型號來進行外泌體等微顆粒研究的科研工作。而每年在美國舉行的國際胞外囊泡大會上，更有不少的科學家的研究中采用了Apogee超靈敏納米流式分析儀來作胞外囊泡研究。由此可見這種新技術在小顆粒檢測中確是帶來不少優(yōu)勢。