賽默飛NanoBRET應(yīng)用于研究活細(xì)胞內(nèi)的分子間相互作用

文章源自賽默飛

關(guān)于分子間相互作用的研究手段。

你試過(guò)多少？

Pull-down、co-IP、酵母雙雜交？

還是FRET、Alpha、蛋白片段互補(bǔ)技術(shù)？

它們足夠靈敏嗎？

它們能研究活細(xì)胞內(nèi)的實(shí)時(shí)互動(dòng)嗎？

它們能定量分析嗎？

試試NanoBRET吧!

它的突出特點(diǎn)就是能夠?qū)崟r(shí)定量的研究活細(xì)胞內(nèi)的分子間相互作用。

聽到這幾個(gè)關(guān)鍵詞：活細(xì)胞、實(shí)時(shí)、定量！是不是有些激動(dòng)？

NanoBRET什么來(lái)頭？

NanoBRET是繼BRET1、BRET2、BRET3之后新一代的分子間相互作用檢測(cè)技術(shù)，是Promega公司2015年的一款力作。
在上市當(dāng)年即被The Scientist雜志評(píng)選為年度十大創(chuàng)新產(chǎn)品。

為什么只有NanoBRET能做到？

與大家熟悉的熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)（FRET）相比，生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)（BRET）有不少優(yōu)點(diǎn)，比如無(wú)需激發(fā)光，背景更低，也避免了光漂白和自發(fā)熒光等問題，是為數(shù)不多的能夠研究細(xì)胞內(nèi)分子間相互作用的技術(shù)。

但傳統(tǒng)的BRET平臺(tái)使用的是海腎熒光素酶（RLuc）作為能量供體，黃色熒光蛋白（YFP）作為能量受體。然而，RLuc和YFP的光譜非常接近（即光譜重疊比較高），因此產(chǎn)生了較高的背景，這種高背景增加了檢測(cè)噪音，也降低了靈敏度和動(dòng)態(tài)范圍。此外，傳統(tǒng)BRET的另一個(gè)應(yīng)用痛點(diǎn)在于：RLuc光輸出量太低！對(duì)于一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞體系，這種研究手段幾乎被槍斃。

NanoBRET平臺(tái)的出現(xiàn)，完美解決了傳統(tǒng)BRET實(shí)驗(yàn)的應(yīng)用痛點(diǎn)，它是大幅度改良的BRET 分析平臺(tái)，使用NanoLuc luciferase 作為能量供體和HaloTag蛋白標(biāo)記的NanoBRET™ 618 熒光基團(tuán)作為受體。來(lái)自NanoLuc 供體的明亮的藍(lán)移發(fā)光信號(hào)耦合到遠(yuǎn)紅移的 HaloTag 受體上后，光譜疊加更佳、信號(hào)更強(qiáng)、且與傳統(tǒng)BRET 分析相比背景更低。

NanoBRET的出現(xiàn)，解決了活細(xì)胞內(nèi)蛋白相互作用實(shí)時(shí)研究的重要一環(huán)！

比如在藥物研發(fā)中，其基本思路是尋找到與細(xì)胞靶蛋白相互作用的小分子。但這種結(jié)合的測(cè)定往往是體外進(jìn)行的生化檢測(cè)，無(wú)法充分模擬細(xì)胞內(nèi)的復(fù)雜環(huán)境。

有時(shí)體外測(cè)定的結(jié)果并不能如實(shí)反應(yīng)體內(nèi)的實(shí)際情況，但多年來(lái)這一瓶頸始終無(wú)法跨越。

2016年發(fā)表在《Nature Communications》上的一項(xiàng)研究利用NanoBRET平臺(tái)成功檢測(cè)了細(xì)胞內(nèi)藥物-靶點(diǎn)的相互作用，不僅如此，還成功測(cè)定了活細(xì)胞中的靶點(diǎn)停留（target residence），也就是藥物與蛋白相互作用的持續(xù)時(shí)間。這讓研究人員能夠優(yōu)化藥物，以便增強(qiáng)作用。

英國(guó)癌癥研究中心的Graeme Walker說(shuō)：“NanoBRET技術(shù)在保持細(xì)胞完整的同時(shí)，采用一種簡(jiǎn)單的方法來(lái)測(cè)定化合物的停留時(shí)間。

這種能力讓我們團(tuán)隊(duì)能夠闡釋探針的新作用機(jī)制。

看到這，想試試這個(gè)全新的平臺(tái)嗎？

如果你的實(shí)驗(yàn)室里能夠找到

他——Varioskan LUX多功能讀數(shù)儀

他——Varioskan Flash多功能讀數(shù)儀

或者他——Luminoskan化學(xué)發(fā)光分析儀

那么恭喜你，你將很容易搭建最新的活細(xì)胞內(nèi)分子間相互作用研究平臺(tái)!

作為全球第一家酶標(biāo)儀生產(chǎn)商，賽默飛秉承了38年來(lái)的酶標(biāo)儀設(shè)計(jì)生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，完美適配最新的NanoBRET技術(shù)！

不謙虛的說(shuō)，化學(xué)發(fā)光功能方面是賽默飛儀器的強(qiáng)項(xiàng)哦！您只需選擇供體與受體光譜對(duì)應(yīng)的化學(xué)發(fā)光濾光片，即可輕松實(shí)現(xiàn)NanoBRET的全部檢測(cè)。

• 1）摒棄了傳統(tǒng)光纖傳輸光信號(hào)的儀器設(shè)計(jì)，賽默飛所有的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)功能模塊都是采用透鏡聚焦的光路設(shè)計(jì)，最大程度的降低光信號(hào)的損失

• 2）即便是多功能的酶標(biāo)儀設(shè)計(jì)，也絕不降低化學(xué)發(fā)光的品質(zhì)，采用獨(dú)立的光路和獨(dú)立的檢測(cè)器

• 3）領(lǐng)先業(yè)內(nèi)的自動(dòng)增益調(diào)節(jié)和校準(zhǔn)系統(tǒng)，讓您無(wú)需費(fèi)心儀器的參數(shù)設(shè)置，每一次讀值都能保證最優(yōu)的靈敏度和最寬廣的動(dòng)態(tài)范圍

• 4）多功能酶標(biāo)儀兼容化學(xué)發(fā)光光譜掃描功能

詳細(xì)配置請(qǐng)咨詢昊諾斯銷售代表，或者點(diǎn)擊“索取資料”留下您的聯(lián)系方式，我們會(huì)盡快與您聯(lián)系。

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