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浸泡型透明化技術(shù)是將樣品浸泡在高折射率溶液中利用滲透壓使組織逐漸透明化，該方法不去除脂質(zhì)，利用高折射率溶液替換組織內(nèi)外的液體，以平衡折射率，浸泡型透明化方法常適用于較小樣本的透明化處理。Clear^T是基于甲酰胺的浸泡型透明化方法，該方法透明速度快，成像效果好，但會使組織略微膨脹，且會使樣本熒光信號淬滅。PEG可以穩(wěn)定蛋白質(zhì)構(gòu)象，繼而發(fā)展了可保留熒光蛋白的Clear^T2的透明化技術(shù)，但該方法透明度比clear^T低，透明化能力受限。SeeDB技術(shù)以果糖和硫代甘油為主要成分。能在幾天內(nèi)將樣本透明化，且體積變化小，并可以與親脂性染料兼容。但該方法因果糖黏度大導(dǎo)致在組織內(nèi)的滲透性較低。由于SeeDB黏度極高，在SeeDB基礎(chǔ)上衍生了FRUIT透明化方法，該方法選擇尿素作為試劑中另一成分，降低了果糖黏度，大大提高試劑流動性和滲透性，加速了試劑在組織中的擴散速率。雖然浸泡型透明化操作比較簡單方便，但浸泡型透明化方法不能去除脂質(zhì)，因此通過該方法處理的樣本透明度有限。
 

3. 水凝膠組織透明化方法

去垢劑可以高效的去除樣本中的脂類物質(zhì)，但是高濃度的去垢劑處理樣本可能會使樣本發(fā)生形變。通過將樣本包埋在水凝膠中，使水凝膠與樣本中的蛋白質(zhì)和核酸分子形成共價連接便可固定和保護細(xì)胞結(jié)構(gòu)，再將樣本置于透明化試劑中即可避免樣本發(fā)生這種形變。CLARITY透明化方法利用凝膠包埋樣本，并利用電場力去除樣本的脂質(zhì)從而使樣本快速透明。SHIELD透明化方法通過環(huán)氧化合物P3PE固定組織實現(xiàn)蛋白的保護，之后使用SDS進行被動或主動除脂。

油性透明化方法透明的樣本透明度高，速度快，能適用于多種組織和器官。但是油性方法所使用的試劑大多毒性較強，并且容易淬滅內(nèi)源性熒光蛋白的信號，不能和細(xì)胞膜上親脂染料相兼容，樣本會有明顯收縮，組織或器官內(nèi)部精確三維結(jié)構(gòu)丟失。水性透明化方法雖然可以部分解決熒光蛋白易淬滅的問題，但是也存在透明時間長，透明能力低的缺點。水凝膠透明化方法操作過程復(fù)雜，且需要一定的設(shè)備。

 

面對種類如此繁多的透明化方法，我們該如何進行選擇呢？

锘海研發(fā)的透明化試劑盒依托測樣服務(wù)中積累到的豐富而寶貴的經(jīng)驗，對各種透明化方法進行測試和比較后對試劑配方進行了精心優(yōu)化，使其在組織熒光保護、樣本形態(tài)維持、降低自發(fā)熒光等方面表現(xiàn)出非常優(yōu)異的性能。能夠輕松實現(xiàn)小鼠腦、心、肝、脾、肺、腎、胃、腸、睪丸、淋巴、胎盤、卵巢等各類組織器官的透明化，適用范圍廣、操作簡便、速度快、效率高，是廣大科研工作者的不二之選。

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