賽默飛NanoBRET應(yīng)用于研究活細胞內(nèi)的分子間相互作用

文章源自賽默飛

關(guān)于分子間相互作用的研究手段。

你試過多少？

Pull-down、co-IP、酵母雙雜交？

還是FRET、Alpha、蛋白片段互補技術(shù)？

它們足夠靈敏嗎？

它們能研究活細胞內(nèi)的實時互動嗎？

它們能定量分析嗎？

試試NanoBRET吧!

它的突出特點就是能夠?qū)崟r定量的研究活細胞內(nèi)的分子間相互作用。

聽到這幾個關(guān)鍵詞：活細胞、實時、定量！是不是有些激動？

NanoBRET什么來頭？

NanoBRET是繼BRET1、BRET2、BRET3之后新一代的分子間相互作用檢測技術(shù)，是Promega公司2015年的一款力作。
在上市當(dāng)年即被The Scientist雜志評選為年度十大創(chuàng)新產(chǎn)品。

為什么只有NanoBRET能做到？

與大家熟悉的熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)（FRET）相比，生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)（BRET）有不少優(yōu)點，比如無需激發(fā)光，背景更低，也避免了光漂白和自發(fā)熒光等問題，是為數(shù)不多的能夠研究細胞內(nèi)分子間相互作用的技術(shù)。

但傳統(tǒng)的BRET平臺使用的是海腎熒光素酶（RLuc）作為能量供體，黃色熒光蛋白（YFP）作為能量受體。然而，RLuc和YFP的光譜非常接近（即光譜重疊比較高），因此產(chǎn)生了較高的背景，這種高背景增加了檢測噪音，也降低了靈敏度和動態(tài)范圍。此外，傳統(tǒng)BRET的另一個應(yīng)用痛點在于：RLuc光輸出量太低！對于一些較難轉(zhuǎn)染的細胞體系，這種研究手段幾乎被槍斃。

NanoBRET平臺的出現(xiàn)，完美解決了傳統(tǒng)BRET實驗的應(yīng)用痛點，它是大幅度改良的BRET 分析平臺，使用NanoLuc luciferase 作為能量供體和HaloTag蛋白標(biāo)記的NanoBRET™ 618 熒光基團作為受體。來自NanoLuc 供體的明亮的藍移發(fā)光信號耦合到遠紅移的 HaloTag 受體上后，光譜疊加更佳、信號更強、且與傳統(tǒng)BRET 分析相比背景更低。

NanoBRET的出現(xiàn)，解決了活細胞內(nèi)蛋白相互作用實時研究的重要一環(huán)！

比如在藥物研發(fā)中，其基本思路是尋找到與細胞靶蛋白相互作用的小分子。但這種結(jié)合的測定往往是體外進行的生化檢測，無法充分模擬細胞內(nèi)的復(fù)雜環(huán)境。

有時體外測定的結(jié)果并不能如實反應(yīng)體內(nèi)的實際情況，但多年來這一瓶頸始終無法跨越。

2016年發(fā)表在《Nature Communications》上的一項研究利用NanoBRET平臺成功檢測了細胞內(nèi)藥物-靶點的相互作用，不僅如此，還成功測定了活細胞中的靶點停留（target residence），也就是藥物與蛋白相互作用的持續(xù)時間。這讓研究人員能夠優(yōu)化藥物，以便增強作用。

英國癌癥研究中心的Graeme Walker說：“NanoBRET技術(shù)在保持細胞完整的同時，采用一種簡單的方法來測定化合物的停留時間。

這種能力讓我們團隊能夠闡釋探針的新作用機制。

看到這，想試試這個全新的平臺嗎？

如果你的實驗室里能夠找到

他——Varioskan LUX多功能讀數(shù)儀

他——Varioskan Flash多功能讀數(shù)儀

或者他——Luminoskan化學(xué)發(fā)光分析儀

那么恭喜你，你將很容易搭建最新的活細胞內(nèi)分子間相互作用研究平臺!

作為全球第一家酶標(biāo)儀生產(chǎn)商，賽默飛秉承了38年來的酶標(biāo)儀設(shè)計生產(chǎn)經(jīng)驗，完美適配最新的NanoBRET技術(shù)！

不謙虛的說，化學(xué)發(fā)光功能方面是賽默飛儀器的強項哦！您只需選擇供體與受體光譜對應(yīng)的化學(xué)發(fā)光濾光片，即可輕松實現(xiàn)NanoBRET的全部檢測。

• 1）摒棄了傳統(tǒng)光纖傳輸光信號的儀器設(shè)計，賽默飛所有的化學(xué)發(fā)光檢測功能模塊都是采用透鏡聚焦的光路設(shè)計，最大程度的降低光信號的損失

• 2）即便是多功能的酶標(biāo)儀設(shè)計，也絕不降低化學(xué)發(fā)光的品質(zhì)，采用獨立的光路和獨立的檢測器

• 3）領(lǐng)先業(yè)內(nèi)的自動增益調(diào)節(jié)和校準系統(tǒng)，讓您無需費心儀器的參數(shù)設(shè)置，每一次讀值都能保證最優(yōu)的靈敏度和最寬廣的動態(tài)范圍

• 4）多功能酶標(biāo)儀兼容化學(xué)發(fā)光光譜掃描功能

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