LHBL2小菊頭蝠肺成纖維樣細胞

LHBL2小菊頭蝠肺成纖維樣細胞在進行細胞傳代培養(yǎng)的時候，胰蛋白酶作用的時間是在1～3分鐘，由于我有好幾個培養(yǎng)瓶（4個以上）的細胞都需要進行傳代操作，那么就胰酶消化這一步而言，我是該一個培養(yǎng)瓶一個培養(yǎng)瓶這么分開做，還是可以幾個同時做呢？同時做我怕后來操作的培養(yǎng)瓶中的細胞消化過度啊！一個一個的做會不會又太費時呢？

培養(yǎng)基 DMEM-H:Dulbecco＇sModifiedEagle＇sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
生長特性 貼壁生長

1、一個一個做！防止污染，和消化細胞時間的不均勻。

2、原則上，為了避免細胞系之間的污染，應該一個一個的做。但是如果你能保證無菌操作的原則，LHBL2小菊頭蝠肺成纖維樣細胞也能把握好各種貼壁細胞系消化的時間，是可以同時做，這樣效率高。建議你剛開始一個一個的做，熟練以后根據(jù)具體情況決定如何做。

3、4個可以同時做，時間到了用移液槍給4個瓶加含血清的培養(yǎng)基終止就行。

4、新手的話強烈建議一個一個處理細胞，特別是消化，除非你養(yǎng)的細胞對消化都不敏感，不然很容易消化過度或者不到位。另外同時處理多個細胞容易出現(xiàn)細胞間交叉污染，一旦污染基本沒救，比細菌污染還要麻煩。

5、剛開始還是一個一個來，LHBL2小菊頭蝠肺成纖維樣細胞消化的時間與細胞的來源有很大關系，貼壁性強的細胞，需要消化的時間較長。一般除了貼壁性強的癌細胞外，細胞消化時間1-3min，還有胰蛋白酶的濃度有關系，濃度高的消化時間要短一些，不然會消化過了，對于細胞的生長不好。你可以在分散打入胰蛋白酶時，輕晃培養(yǎng)瓶，在顯微鏡下看見細胞開始變亮，皺縮，卷邊的時候就加入培養(yǎng)液或者血清終止消化。

失敗的關鍵原因還是細胞復蘇的時候沒有迅速解凍的緣故，最后一次成功是因為注意到這個問題。細胞的復蘇及凍存遵循慢凍速融原則，如果LHBL2小菊頭蝠肺成纖維樣細胞取出后沒有在盡可能短的時間里解凍的話細胞內(nèi)部會產(chǎn)生很多冰晶對細胞就有致命的損失了。另外，細胞的確應該是在液氮條件下保存，如果液氮可以保存1-2年的細胞，放-80度保存恐怕不到三個月就不行了，并且狀態(tài)會很差。ZYC3168    人腎細胞腺癌細胞    769-P    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3169    人腎上腺皮質(zhì)小細胞癌細胞    SW-13    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3170    人膀胱移行細胞癌    SW 780 [SW-780, SW780]    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3171    人膀胱移行細胞癌    J82    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3172    人膀胱移行細胞癌    UM-UC-3    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3173    人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤    U-118 MG    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3174    人間皮瘤細胞    NCI-H2452 [H2452]    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3175    人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞    WERI-Rb-1    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3176    人急性淋巴細胞白血病細胞    CEM/C1    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3177    人結(jié)腸腺癌肺轉(zhuǎn)移細胞    T84    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3178    人結(jié)直腸腺癌細胞    NCI-H716 [H716]    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3179    人正常前列腺上皮細胞    RWPE-1    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3180    人正常前列腺基質(zhì)永生化細胞    WPMY-1    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS