T4 RNA 連接酶 2（截短型 ）

T4 RNA 連接酶 2（截短型 ）產(chǎn)品及特點：

T4 RNA 連接酶2（截短型），又稱T4 RNL2截短型，可特異性地將DNA 或RNA 的預(yù)腺苷�；� 5´末端連接到 RNA 3´末端。該酶連接時不需要 ATP ，但需要預(yù)腺苷�；�底物。該酶的表達來自 E. coli質(zhì)粒，該質(zhì)粒編碼T4 RNA連接酶 2 基因的前249 個氨基酸。與全長的 T4 RNA 連接酶 2不同，T4 RNL2截短型不能將底物的 5´末端腺苷酰化，因此無法將RNA 或DNA的 5´ 磷酸末端連接到 RNA 3´ 端。該酶，可用于microRNA克隆中接頭連接的優(yōu)化，因為此酶只能利用腺苷酰化的引物，因此，可以降低連接背景。其結(jié)構(gòu)式如下圖：

1. 將 5 預(yù)腺苷化的 DNA 或 RNA 連接到任何 RNA 3 末端

2. 將單鏈腺苷化引物連接至小 RNA 上，用于 cDNA 克隆文庫構(gòu)建

3. 將單鏈腺苷化引物連接至 RNA 上，用于鏈特異 cDNA 文庫構(gòu)建

4. 無單鏈和雙鏈 DNA 核酸外切酶、核酸內(nèi)切酶、RNase 以及磷酸酶的污染。

反應(yīng)條件

1X T4 RNA 連接酶反應(yīng)緩沖液 [50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃) ，10 mMMgCl2，1 mM DTT]，25℃ 溫育。

隨酶提供試劑

單位定義

200 單位指 10 μl 反應(yīng)體系中，25℃ 條件下，1 小時將 80% 的 31-mer RNA連接到預(yù)腺苷化 17-mer DNA 末端 [通用 miRNA 克隆接頭] 所需的酶量。5´-FAM- rArGrUrCrGrUrArGrCrCrUrUrUrArUrCrCrGrArGrArUrUrCrArGrCrArArUrA-3´5´-rAppCTGTAGGCACCATCAAT–NH2-3´

Buffer成分

10 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，0.1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50%Glycerol，pH 7.5 @ 25℃

熱失活

65℃ 加熱 20 分鐘。

T4 RNA 連接酶 2（截短型 ）細胞生物學(xué)研究有以下幾個方面：

細胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：①細胞核、染色體以及基因表達的研究；②生物膜與細胞器的研究；③細胞骨架體系的研究；④細胞增殖及其調(diào)控；⑤細胞分化及其調(diào)控；⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；⑦細胞的起源與進化；⑧細胞工程.

T4 RNA 連接酶 2（截短型 ）細胞生物學(xué)研究的常用技術(shù)有哪些：

1.顯微技術(shù)：包括顯微觀察,顯微操作.

2細胞組分分析技術(shù)：離心分離技術(shù),生物大分子定位技術(shù),定量細胞化學(xué)分析技術(shù).

3.細胞工程：細胞培養(yǎng)。

T4 RNA 連接酶 2（截短型 ）:XY70908DNA PAGE膠回收試劑盒30次|100次XY80202柱式DNA PAGE膠回收試盒50次XY80401柱式OLIGO回收試劑盒50次XY70604miRNA PAGE膠回收試劑盒40次XY80203柱式miRNA PAGE膠回收試劑盒50次XY81105瓊脂糖100gXY130835低熔點瓊脂糖2.5g|5gXY100864丙烯酰胺溶液(干粉型)200mLXY100877甲叉雙丙烯酰胺25gXY100880四甲基乙二胺1.5mLXY100879過硫酸銨0.1g×10XY100873尿素100gXY100933MOPS(電泳級)100gXY80935剝離硅烷50mLXY90308親和硅烷25mLXY90503電泳級甘油100mLXY100934電泳級二甲苯藍FF溶液10mLXY100882電泳級溴酚藍溶液10mLXY100948電泳級橙黃G溶液10mLXY130965PAGE膠長加樣槍頭1盒XY130966水飽和正丁醇10mLXY130967預(yù)混型丙烯酰胺-甲叉雙丙烯干粉(19:1)100gXY130968預(yù)混型丙烯酰胺-甲叉雙丙烯干粉(29:1)100g
核酸擴增(PCR)