熒光探針(JAK2 JH2 Tracer)

特別提示：包括熒光探針(JAK2 JH2 Tracer)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：熒光探針(JAK2 JH2 Tracer)
英文名稱：JAK2 JH2 Tracer
產(chǎn)品貨號：M07279
產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg

JAK2JH2Tracer是一種熒光探針，對JAK2JH2結(jié)構(gòu)域有很強(qiáng)的親和力，Kd值為0.2μM。
注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

CAS號：2101955-00-2
純度：98.07%
分子式：C₃₈H₂₇F₂N₇O₆S
分子量：747.73
結(jié)構(gòu)式：

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

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名稱：聚凝胺
貨號：SY0605
規(guī)格：500μL|5×500μL
聚凝胺是一種多聚陽離子聚合物，常用于哺乳動物細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)以增強(qiáng)脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率。Polybrene目前廣泛用于逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染，慢病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染，作用機(jī)理可能是通過中和細(xì)胞表面唾液酸與病毒顆粒之間的靜電排斥從而促進(jìn)吸附作用。Polybrene也是一種有名的抗肝素劑（肝素拮抗劑），常用來生產(chǎn)非特異性凝集的紅細(xì)胞。另外Polybrene也多用于蛋白測序，因?yàn)樾�劑量的Polybrene在自動測序分析可明顯改善多肽的降解現(xiàn)象。PVDF膜加入polybrene還能提高膜的親和性。

本產(chǎn)品為即用型溶液，粉末用0.9%NaCl配置成10mg/ml的溶液，并用0.22μM濾膜過濾除菌。使用時(shí)一般按1:1000-1：2000稀釋，依細(xì)胞種類不同稀釋比例不同，具體查閱相關(guān)文獻(xiàn)。
注：Polybrene對某些細(xì)胞（如末端分化的神經(jīng)元，DC細(xì)胞）毒性較大，初次應(yīng)用建議先做毒性測試。

操作步驟(僅供參考，具體使用濃度請參考相關(guān)文獻(xiàn))

實(shí)驗(yàn)1：逆轉(zhuǎn)錄病毒感染（Retroviral Infection）
（1）重組逆轉(zhuǎn)錄病毒原液的制備：取5ml生長培養(yǎng)基（5%血清）加入約含單層轉(zhuǎn)染逆轉(zhuǎn)錄包裝細(xì)胞的100mm培養(yǎng)盤內(nèi)。孵育24h后，吸去培養(yǎng)液并用0.45μm濾器過濾。
（2）待感染細(xì)胞的培養(yǎng)：100mm培養(yǎng)盤內(nèi)加入10ml完全培養(yǎng)基，細(xì)胞密度為5×105/盤。
（3）病毒感染：細(xì)胞培養(yǎng)24h后，吸去完全培養(yǎng)液。用含polybrene的2ml病毒上清 （或?qū)⒉《驹�液稀釋�?ml）感染細(xì)胞，polybrene的終濃度為5μg-10μg/ml。37℃孵育3-6h。
（4）收集病毒顆粒：加入8ml完全培養(yǎng)基。感染3天后，按照1:5的比例用選擇培養(yǎng)基裂解細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)2：轉(zhuǎn)染
（1）完全生長培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，培養(yǎng)細(xì)胞密度約50%；
（2）孵育細(xì)胞18-24h后準(zhǔn)備DNA-培養(yǎng)基- Polybrene混合液，按如下操作制備混合液：①添加完全培養(yǎng)基（60mm培養(yǎng)皿2ml，100mm培養(yǎng)皿3ml），37℃預(yù)熱；②添加10ng~10µg質(zhì)粒輕輕混勻；③加入Polybrene至終濃度為5μg-10μg/ml。輕輕混勻。以上每個(gè)成分需要按順序加入。
（3）去除培養(yǎng)基，在細(xì)胞中加入DNA-培養(yǎng)基-Polybrene溶液，在37℃孵育細(xì)胞6-20h。細(xì)胞培養(yǎng)的前6h內(nèi)約每1.5h輕柔混勻。
（4）去除DNA-培養(yǎng)基-Polybrene溶液。用DMSO shock solution（15%DMSO in 1X HBSS）輕輕蓋住細(xì)胞（60mm培養(yǎng)皿3ml，100mm培養(yǎng)皿4ml）。每次加入溶液時(shí)用手輕晃培養(yǎng)盤10s，使得液體均勻分布。然后37℃孵育細(xì)胞4min。
（5）立即去除DMSO shock solution，用完全生長培養(yǎng)基輕輕清洗細(xì)胞2次。對于60mm培養(yǎng)皿每次用5ml培養(yǎng)液清洗，100mm培養(yǎng)皿每次用10ml培養(yǎng)液清洗。
（6）加入完全培養(yǎng)基到細(xì)胞中；
（7）穩(wěn)定轉(zhuǎn)化：去除生長培養(yǎng)基，按照1:5的比例用選擇培養(yǎng)基裂解細(xì)胞。
瞬時(shí)表達(dá)：去除生長培養(yǎng)基，加入新鮮的生長培養(yǎng)基。24-72h后收獲細(xì)胞。

儲存條件：-20℃，避免反復(fù)凍融，有效期2年。

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貨號	名稱	規(guī)格
ALH613	重組人BFGF	50μg|200μg|2mg
SY0605	聚凝胺	500μL|5×500μL
M00085	Calcitriol	2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
M02573	6-Biopterin	1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
M02871	鉀離子通道阻斷劑(Dofetilide)	1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
M03500	Ribavirin	1mL(10mM)|100mg|200mg|500mg