磷酸鈣法細胞轉染試劑

特別提示：包括磷酸鈣法細胞轉染試劑在內，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：磷酸鈣法細胞轉染試劑
英文名稱：Calcium Phosphate Cell Transfection Kit
產(chǎn)品貨號：SY0604
產(chǎn)品規(guī)格：200T

磷酸鈣法轉染DNA是基于形成磷酸鈣-DNA沉淀的原理：磷酸鈣可促使細胞膜和DNA的結合，之后通過細胞內吞的作用將外源DNA轉入目的細胞。該方法曾被用于多種細胞系的轉染。百奧萊博的磷酸鈣法細胞轉染試劑是在傳統(tǒng)磷酸鈣法的基礎上經(jīng)過特別優(yōu)化，不僅在轉染效率有了較大提高，且降低了細胞毒性，特別適合于293或293T細胞的轉染，對其他大多數(shù)常見細胞如Hela、CHO也具有較好的轉染效果，不僅適用于細胞的瞬時轉染，且適用于穩(wěn)轉株的篩選。

產(chǎn)品組份：
CaCl2溶液————20ml
BBS溶液—————20ml

注意事項：
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2）高純度的質粒是獲得高轉染效率的必要條件，確保A260/A280＞1.8，且電泳檢測抽提到的質粒90%以上都是超螺旋。
3）在用磷酸鈣法轉染細胞時應使用濃度不高于5%的CO2，CO2的最佳濃度為3%左右。
4）BBS溶液的pH值直接關系到轉染效率，盡量避免把BBS溶液長時間暴露在空氣中，以免被空氣中的CO2酸化。
5）轉染時由于質粒、細胞不同，最佳的質粒用量需自行摸索。

儲存條件：-20℃，有效期一年

使用說明：
<1．對于貼壁細胞（以6孔板為例）
①轉染前一天（20-24h），胰酶消化細胞并計數(shù)，細胞鋪板，使其在轉染時密度為70-90%。
②在轉染前30-60min，吸去細胞培養(yǎng)液，加入新鮮的完全培養(yǎng)液（不含抗生素）2mL。
  注：轉染時最好使用新鮮配制的培養(yǎng)液；轉染用的培養(yǎng)液可以在配制后分裝凍存，使用時再解凍。
③取2-6μg待轉染的質粒DNA（質�？傮w積不宜超過20μL），加入到100μLCaCl2溶液中，充分混勻。
④把DNA- CaCl2溶液加入到100 μLBBS溶液中，混勻，室溫孵育10-20 min。此時不會產(chǎn)生可見的沉淀。
  注：該步驟順序不能反，需把DNA- CaCl2溶液加入到BBS溶液中，不要把BBS溶液加入到DNA- CaCl2溶液中。
⑤把DNA- CaCl2-BBS混合物均勻滴加到整個6孔板內。5%CO2，37℃培養(yǎng)細胞。
⑥根據(jù)實驗要求和磷酸鈣對于不同細胞的毒性不同，在4-16 h后輕輕晃動培養(yǎng)板數(shù)次以充分懸浮一些磷酸鈣沉淀，吸去含磷酸鈣沉淀的培養(yǎng)液，加入2 mL新鮮的完全培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。
⑦通常在轉染約24 h后就可以檢測到轉染基因的表達。
2．對于懸浮細胞（以6孔板為例）
①離心收集懸浮細胞，用PBS洗滌一次。
②按照上面的步驟③和④制備DNA- CaCl2-BBS混合物。
③每106個細胞的沉淀，用100μLDNA- CaCl2-BBS混合物重新懸浮，室溫放置20 min。
④在一個6孔板孔內加入2ml完全培養(yǎng)液（不含抗生素），然后加入來自上一步的細胞-DNA- CaCl2-BBS混合物，混勻。
⑤ 5%CO2，37℃培養(yǎng)細胞。
⑥根據(jù)實驗要求和磷酸鈣對于不同細胞的毒性不同，在4-16 h后離心收集細胞，用PBS洗一次，然后用2 mL完全培養(yǎng)液重新懸浮細胞，繼續(xù)培養(yǎng)。
⑦通常在轉染約24小時后就可以檢測到轉染基因的表達。

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貨號	名稱	規(guī)格
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M02790	20-HETE	2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
M02869	鉀離子通道陽性調節(jié)劑(NS309)	1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

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