溶酶體染色試劑盒(紅色熒光)-L03

特別提示：包括溶酶體染色試劑盒(紅色熒光)-L03在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產品名稱：溶酶體染色試劑盒(紅色熒光)-L03
產品貨號：HR8363
產品規(guī)格：500T|1000T

L03溶酶體染色試劑盒是利用L系列探針進行溶酶體特異性染色的試劑盒。本試劑盒中的L03溶酶體染色探針為紅色熒光標記的溶酶體探針，具有577/590nm的最大激發(fā)/發(fā)射波長。
L系列探針是對活細胞中的溶酶體進行選擇性染色的一類熒光染料，該系列探針可以選擇性標記溶酶體，只需要納摩爾級(nM)濃度即可有效標記活細胞。
L系列探針可自由穿過細胞膜，適用于觀察溶酶體內部生物合成及相關發(fā)病機理。
L系列溶酶體探針具有多種顏色可以選擇，可根據情況對樣品進行多色標記實驗。除了本試劑盒的紅色熒光探針，我公司還可以提供綠色、藍色、橙色等顏色的染色試劑盒。

儲存條件：染料-20℃避光保存；避免反復凍融；稀釋液2-8℃保存。
有效期：6個月

※ ※ ※ 使用前請仔細閱讀產品說明書 ※ ※ ※
使用限制：本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。
產品更新：我公司會更新或升級產品，以優(yōu)化和增強其使用性能，產品說明書會進行相應的版本更新。使用產品時，請參照隨產品附帶的說明書，不要參照網上下載的說明書，可能是不同的版本。需要最新電子版說明書時可以在收到產品后發(fā)郵件索取。
使用安全：使用時需要合適的實驗室外套，一次性手套。避免皮膚或粘膜與試劑接觸。如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應立即用水沖洗。

注意事項：
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。
● 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。
● 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。
● 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹底清除殘留清潔劑。
● 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規(guī)定程序處理。

試劑盒以外自備試劑和儀器：
● PBS ● HBSS ●離心機 ●熒光顯微鏡/激光共聚焦顯微鏡

使用方法：

使用注意事項：
● L03染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時在室溫時為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預熱，否者容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。
● 使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進行簡短離心使DMSO溶液集中于管底。
● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
●標記的條件因細胞種類而異，根據不同樣本的實際染色結果做相應調整，在每次實驗前，請先根據不同的實驗要求、細胞類型、細胞的膜通透性等進行優(yōu)化，確定最佳條件。以下方法僅供參考。
●染色后立即進行分析。

1．染色工作液配制：
根據樣本數量，用染料稀釋液將L03熒光染料100倍稀釋，再用相應的培養(yǎng)基或者HBSS緩沖液75-100倍稀釋，配制成染色工作液。
【注】:
● 也可以直接用相應的培養(yǎng)基或HBSS等緩沖液稀釋L03染料至所需濃度。
● 建議收到產品后，根據單次使用量，對母液進行小量分裝，每次使用一管，試劑-20℃避光凍存，一年穩(wěn)定。開始實驗前，使用培養(yǎng)基或HBSS緩沖液稀釋儲存液到需要的工作濃度。
工作濃度為根據不同細胞的預實驗結果確定的最佳工作濃度，一般染色終濃度7500-10000倍稀釋。
● 工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。
● 為了降低探針加載過度可能引起的假陽性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。
● 若細胞在染色后于不含染料的培養(yǎng)基中孵育，熒光信號會衰減。
2．細胞染色
2.1對于貼壁細胞
1)將細胞置于培養(yǎng)皿中的蓋玻片上，加入合適培養(yǎng)基，使其爬片生長。
2)待細胞生長到合適豐度，吸除培養(yǎng)液，加入適量37℃預熱的含探針工作液。于生長狀態(tài)下孵育30分鐘～2小時(具體孵育時間需根據細胞類型而定)。
3)利用新鮮培養(yǎng)基替換上述染色液并在熒光顯微鏡(含合適濾片)下觀察。
【注】:
● 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間。
2.2對于懸浮細胞
1)離心，吸除上清。
2)利用37℃預熱的探針工作液重懸細胞，于生長狀態(tài)下孵育30分鐘～2小時(具體時間需根據細胞類型而定)。
3)離心，吸除染色液，加入新鮮培養(yǎng)液重懸細胞。
4)置于熒光鏡下觀察。
【注】:
●對于懸浮細胞，也可將細胞貼附于經細胞粘合劑處理過的蓋玻片上，然后使用類似于貼壁細胞的方法進行染色。
● 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間。
3．觀察結果：
在熒光顯微鏡(含合適濾片)下觀察細胞。最大激發(fā)/發(fā)射波長為577/590nm。

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貨號	名稱	規(guī)格
SNM349	超快速無毒改良巴氏染液	500ml×4|250ml×4|50ml×4
KFS128	茜素紅染色試劑盒(ph8.3)	10ml
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HR8363	溶酶體染色試劑盒(紅色熒光)-L03	500T|1000T
HR8434	細胞膜染色試劑盒(橙色熒光)-M03	1000T|5000T

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名稱：血管通透性測試(伊文思藍)染液
貨號：SNM354
規(guī)格：100ml×1|20ml×1

名稱：溶酶體綠色熒光探針
貨號：KFS130
規(guī)格：200μL
溶酶體綠色熒光探針LysoGreen 探針是熒光素pH 指示探針，可以用來區(qū)分酸性細胞器，使得動態(tài)研究活細胞內溶酶體生物合成和功能成為可能。LysoView 染料是在酸性細胞器內富集，可導致其質子化。而質子化可以減少染料的側鏈上弱堿，減少熒光淬滅，使得生產的熒光強度增加。因此，LysoGreen 試劑表現(xiàn)出pH 依賴性，在酸化條件下，熒光強度增加。

這些探針可以單獨或者組合使用，檢測酸化的溶酶體和細胞內溶酶體的功能改變。例如，在某些腫瘤細胞的溶酶體具有較低的pH 值，而有的腫瘤細胞則相反。此外，一些細胞的細胞器酸化缺陷表現(xiàn)為囊性纖維化和其他病癥。LysoGreen 探針在此類應用上非常廣泛有意義。

濃度：1 mM in DMSO
儲存：-20℃，避光，有效期6個月。

名稱：剛果紅(β-淀粉樣蛋白染料)
貨號：KFS138
規(guī)格：10mg

分子量：696.66
溶解性：溶于水
激發(fā)波長：497nm
儲存：-20℃，避光，有效期一年

名稱：細胞膜染色試劑盒(綠色熒光)-M01
貨號：HR8433
規(guī)格：1000T|5000T
細胞膜染色試劑盒是用一種親脂性的綠色熒光探針進行細胞膜染色。染色液O 進入細胞膜后，在整個細胞膜上擴散，最佳濃度時可以使整個細胞膜染色。染色液O在進入細胞膜之前熒光非常弱，當與細胞膜結合后其熒光強度大大增強，被激發(fā)后可以發(fā)出綠色的熒光，具有很高的淬滅常數和激發(fā)態(tài)壽命�？梢杂脴藴实腇ITC濾光片檢測。
染色液O 通常不會明顯影響細胞的活力，因此被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經等細胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑(long-term tracer)。除了最簡單的細胞膜熒光標記外，還可以用于檢測細胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過程中細胞遷移，通過FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)檢測脂在細胞膜上的擴散，檢測細胞毒性和標記脂蛋白等。

儲存條件：4℃避光保存。長期保存-20℃避光保存。
有效期：六個月。

注意事項：
●本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。
● 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。
● 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹底清除殘留清潔劑。
● 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

試劑盒以外自備試劑和儀器：
● PBS ●培養(yǎng)基 ● 移液器及吸頭 ●熒光顯微鏡/流式細胞儀

使用方法：

使用注意事項：
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。
● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
●染色后立即進行分析。
●染色時間根據不同樣本的實際染色結果做相應調整。
●本染色液可用于細胞涂片、細胞的檢測。
A：染色工作液的配制：
根據樣品數用純水將試劑B 進行10倍稀釋，放入37℃培養(yǎng)箱預熱。用稀釋后的試劑B將染色液O 進行200-1000倍稀釋，配制成染色工作液。
【注】工作液最佳最終濃度建議根據不同細胞系和實驗體系做預實驗來優(yōu)化。
B：懸浮細胞染色
1．用PBS 洗滌細胞2次。
2．加入適量體積的染色工作液重懸細胞，使其密度大約為1×106/mL。
3．37 ℃孵育細胞 5～20min，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同。可以20min 作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結果。
4．孵育結束，500 Xg離心5min。
5．傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預熱的培養(yǎng)液重懸細胞。
6．重復(4)，(5)步驟兩次以上
C：貼壁細胞染色
1．用PBS 洗滌細胞2次。
2．細胞培養(yǎng)板中或細胞爬片上加入適量體積的染色工作液。
3．37 ℃孵育細胞 5～20min，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同�？梢�20min 作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結果。
4．吸干染色工作液，用培養(yǎng)液洗培養(yǎng)板或蓋玻片2～3次，每次用預熱的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，孵育5～10min，然后吸干培養(yǎng)基。
D：用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測
最大激發(fā)波長為488nm，最大發(fā)射波長為500nm。