細(xì)菌核糖體提取試劑盒

特別提示：包括細(xì)菌核糖體提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：細(xì)菌核糖體提取試劑盒
英文名稱：Bacterial ribosome Extraction Kit
產(chǎn)品貨號：HR8192
產(chǎn)品規(guī)格：50T|100T



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名稱：細(xì)胞核微量制備試劑盒
貨號：BTN100601
規(guī)格：50次
用高密度介質(zhì)來分離動物軟體組織(如肝臟、脾臟等)細(xì)胞核是目前主流的方法，它是由Chauveau于1956年發(fā)明，其原理是細(xì)胞核的密度較大，在高速離心條件下(40000g 1小時)可在高密度介質(zhì)(2.2mol/l 蔗糖溶液)中沉降下來，從而達(dá)到與細(xì)胞質(zhì)其它成分分開的目的。該方法能通過一步離心得到較高純度的細(xì)胞核，得到廣泛應(yīng)用。本產(chǎn)品就是在Chauveau方法的基礎(chǔ)上優(yōu)化改進(jìn)而來。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1．基于密度梯度分離，可有效去除細(xì)胞質(zhì)及其他細(xì)胞器，得到的細(xì)胞核純凈。
2．加進(jìn)氯化鈣、氯化鎂、氯化鉀等改變分離介質(zhì)滲透壓的物質(zhì)，減少了細(xì)胞核的脆性，增加了細(xì)胞核的完整性。
3．精心調(diào)節(jié)了介質(zhì)的pH，防止細(xì)胞核在分離過程中的聚集，還能保持細(xì)胞核的精細(xì)結(jié)構(gòu)。
4．快速，整個操作過程僅需1小時即可完成(對一個樣品而言)。
5．提供染色試劑，可以在普通光學(xué)顯微鏡下檢測純化的細(xì)胞核的純度。
6．處理溫和，得到的細(xì)胞核中的大部分蛋白質(zhì)都具有活性，可以用于膠遲阻實(shí)驗(yàn)、酶活性分析細(xì)胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究；也可用于超大片段DNA的純化。
7．不但適用于動物和植物培養(yǎng)細(xì)胞，還能用于實(shí)體組織(能用Dounce或Potter 勻漿器勻漿的組織均可)。
8．一次微量提取足夠處理0.1 克組織或10E7個培養(yǎng)細(xì)胞，本產(chǎn)品足夠50次微量提取。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A成分一	100ml
溶液A成分二(干粉)	約20g
溶液B成分一	50ml
溶液B成分二(干粉)	約100g
細(xì)胞核染色液	1套
說明書	1份

儲存條件：常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。

使用方法：

一、準(zhǔn)備工作：先將溶液A的成分二(干粉)全部加入到溶液A成分一(溶液)中，搖晃溶解后得到100mL溶液A。將溶液B的成分二(干粉)全部加入到溶液B成分一(溶液)中，搖晃溶解后得到50mL溶液B。4℃放置不能超過2 天，長期放置需要放-20℃。

二、微量細(xì)胞核分離(放量提取各試劑的用量可以按比例放大)：
1．對組織細(xì)胞：稱取100～200mg 新鮮組織(如動物肝臟、腦、心肌和植物葉片等)，用自備的PBS或生理鹽水洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀或刀片將其剪為碎塊(最好大小為1cm3，過小反而不利于勻漿)放入小容量Dounce或Potter 玻璃勻漿器內(nèi)。
2．對培養(yǎng)細(xì)胞：用自備胰酶按標(biāo)準(zhǔn)方法消化培養(yǎng)細(xì)胞，PBS 洗滌，800×g 5～10分鐘離心收集細(xì)胞，計(jì)數(shù)。每次微量提取需要5×10E7個細(xì)胞，加入1.0mL預(yù)冷的溶液A重懸細(xì)胞，然后轉(zhuǎn)移到小容量Dounce或Potter 玻璃勻漿器內(nèi)
3．用Dounce或Potter 組織勻漿器在冰上破碎組織或細(xì)胞。如果用手動勻漿器，一般需要20～30次。如果用電動勻漿器，一般需要處理3-5次，每次5～10秒鐘(轉(zhuǎn)速為500r/min)。
4．將勻漿液轉(zhuǎn)移到離心管中。如果勻漿液有可見的結(jié)締組織和未破碎的組織塊，可以用三層自備的紗布放在1.5mL離心管管口，將勻漿液過濾進(jìn)入離心管�？扇∩倭繛V液涂在載玻片上制得涂片A，自然干燥涂片以便染色做顯微鏡觀察。
5．4℃，700-800×g 水平離心5-10分鐘。細(xì)胞核沉淀在收集管底部，棄上清�？扇∩倭可锨逡和吭谳d玻片上制得涂片B，自然干燥涂片以便染色做顯微鏡觀察。
6．加入0.5mL預(yù)冷溶液A重懸沉淀。用預(yù)冷的勻漿器(用前需要將表面的組織洗去)重懸沉淀�？扇∩倭可锨逡和吭谳d玻片上制得涂片C，自然干燥涂片以便染色做顯微鏡觀察。
7．在水平型離心管中加入0.5mL預(yù)冷的溶液B，然后靠管壁慢慢加入上步得到的重懸液。
8．在4℃ 23000g離心30分鐘，管底的沉淀即為細(xì)胞核。
9．小心吸棄上清液。注意：上清一般比較粘稠，最好倒立一段時間。
10．用0.5mL溶液A重懸沉淀。
11．在4℃ 1500g離心5分鐘，吸棄上清，沉淀即為純凈的細(xì)胞核。可以直接使用，也可以加等體積的自備甘油，混勻后放液氮或-70℃保存�？扇∩倭可蠎腋∫和吭谳d玻片上制得涂片D，自然干燥涂片以便染色做顯微鏡觀察。
12．用本方法一般可以從0.1g 肝臟組織中純化到1-2×107個細(xì)胞核。如果后續(xù)試驗(yàn)是Western Blot和2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解細(xì)胞核后上樣。

三、顯微鏡檢測涂片，計(jì)算效率
1．將干燥后的A-D 四張涂片加入固定液固定15分鐘，晾干。
2．Giemsa 染液染10分鐘。
3．自備蒸餾水漂洗數(shù)秒，用濾紙吸干水。
4．用顯微鏡(40×)檢查涂片，細(xì)胞核將呈紫紅色，混雜的細(xì)胞質(zhì)為淺藍(lán)色碎片。根據(jù)每步細(xì)胞核的數(shù)量可以粗略估計(jì)回收效率。

疑難解答：
本說明書強(qiáng)烈建議用離心力g 而不是轉(zhuǎn)速計(jì)算所需的離心速度，因?yàn)椴煌�的離心機(jī)轉(zhuǎn)子直徑不同，即使是同一轉(zhuǎn)速，其離心力也不同。如果只知道轉(zhuǎn)速，可用下式計(jì)算離心力。
G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２
G為離心力，一般以g(重力加速度)的倍數(shù)來表示；[rpm]２即轉(zhuǎn)速的平方；
R為離心機(jī)轉(zhuǎn)子的半徑(單位為厘米)。

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