Tth DNA聚合酶

特別提示：包括Tth DNA聚合酶在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：Tth DNA聚合酶
英文名稱：Tth DNA Polymerase
產(chǎn)品貨號(hào)：BTN90501
產(chǎn)品規(guī)格：250U

本酶來(lái)源于嗜熱菌Thermus thermophilus HB8。在有Mg2+等二價(jià)陽(yáng)離子存在的情況下，具有DNA多聚酶活性。它與Taq酶一樣被廣泛用于PCR反應(yīng)，但耐熱性比Taq酶高，因此對(duì)高GC含量模板的PCR 也有較好的效果。本酶基本上沒(méi)有3′→5′外切酶活性及5′→3′外切酶活性，所以也可用于雙脫氧法測(cè)序。另外，本酶具有RTase活性，在Mn2+存在的情況下，RTase活性會(huì)得到強(qiáng)化。利用該特性，可以用來(lái)在同一管中進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和PCR反應(yīng)，即一步法RT PCR。(但是，在Mn2+存在時(shí)，RT-PCR的準(zhǔn)確性不高)此外，本酶與Taq DNA多聚酶一樣，PCR產(chǎn)物可通過(guò)T載體進(jìn)行TA克隆。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1．RT-PCR反應(yīng)的特異性增加：在較高的溫度下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，增加了引物雜交和延伸的特異性。
2．二級(jí)結(jié)構(gòu)減少：在較高的溫度下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，減少了由于RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)引起的問(wèn)題。

產(chǎn)品組成：

成分	規(guī)格
Tth DNA聚合酶(5U/μL)	50μl
10×Tth Buffer	1ml
說(shuō)明書(shū)	1份

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
以λDNA為模板，以10×Tth Buffer(+MgCl2)作為緩沖液進(jìn)行體積為50μL的PCR擴(kuò)增反應(yīng)為例

1．按下列組份配制PCR反應(yīng)液。

成分	終濃度	用量
Tth DNA聚合酶(5U/μL)	1.25U	0.25μl
10×Tth Buffer(+MgCl2)	1×	5μl
dNTP Mixture(各2.5mM)	各0.2mM	4μl
模板DNA	50pg～1μg	詳見(jiàn)下表
引物1(10μM)	0.1～1μM	最多到1μL
引物2(10μM)	0.1～1μM	最多到1μL
滅菌蒸餾水		加到50μL

推薦50μL PCR反應(yīng)體系中模板DNA推薦使用量：

哺乳動(dòng)物基因組DNA	0.5～1μg
酵母基因組DNA	5～500ng
細(xì)菌基因組DNA	0.5～50ng
質(zhì)粒DNA	5～500pg
PCR回收片段	1～100pg

2．PCR反應(yīng)條件
以λDNA為模板，擴(kuò)增1kbp的DNA片段的PCR反應(yīng)條件如下：

注：PCR反應(yīng)條件視模板、引物等的結(jié)構(gòu)條件不同而各異。在實(shí)際操作中需根據(jù)模板、目的片段的大小、堿基序列和引物的長(zhǎng)短等具體情況，設(shè)定最佳的反應(yīng)條件(溫度、時(shí)間等)。

注意事項(xiàng)：
1．循環(huán)測(cè)序：該酶為耐熱性酶，可通過(guò)與PCR 同樣的溫度條件進(jìn)行測(cè)序反應(yīng)。由于其高溫穩(wěn)定性好，對(duì)于復(fù)雜高級(jí)結(jié)構(gòu)的模板效果較好。
2．引物：用于耐熱性酶測(cè)序的引物需比用于非耐酶測(cè)序的引物設(shè)定更長(zhǎng)的時(shí)間。采用較短的引物時(shí)，可能會(huì)出現(xiàn)不能獲得條帶變淡的情況。

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貨號(hào)	名稱	規(guī)格
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YT411	DNase I	200U|1000U
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SV0201	BsoBI限制性內(nèi)切酶	50KU|10KU
SV0468	MfeI-HF限制性內(nèi)切酶	2500U|500U|250U
SV0593	PluTI限制性內(nèi)切酶	2500U|500U
SV0606	PsiI限制性內(nèi)切酶	1KU|200U

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