干血斑基因組DNA提取試劑盒（離心吸附柱法)

特別提示：包括干血斑基因組DNA提取試劑盒（離心吸附柱法)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：干血斑基因組DNA提取試劑盒（離心吸附柱法)
英文名稱：Extraction kit for genomic DNA from blood spots
產(chǎn)品貨號：WH0004
產(chǎn)品規(guī)格：50次|200次

本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和獨特的緩沖液系統(tǒng)，提取干血斑中的基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司特有新型材料，高效、專一吸附DNA，可最大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機化合物。提取的基因組DNA片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、熒光定量PCR，文庫構(gòu)建、Southern雜交等實驗。

試劑盒特點：
·樣本適用廣泛：可從多種類型干血斑中直接提取基因組DNA。
·高質(zhì)量：獨特的裂解緩沖體系，純化的DNA具有高濃度，高純度，完整性好等特點，滿足芯片雜交，高通量測序等實驗需求。
·快速無毒：采用硅膠膜吸附原理，無需酚/lǜ仿，1h內(nèi)即可完成實驗。

實驗舉例：

按照說明書操作提取人干血斑樣本，起始量：3片3×3mm干血斑樣品，洗脫體積50μl，取2μl作為PCR模板，PCR反應(yīng)體系為20μl，分別對Actb（300bp)，PrP（750bp)和DN1.0（1kb)三個基因進行PCR擴增，電泳上樣量5μl。

試劑盒組成：

組分	50T	200T
緩沖液GA	15ml	50 ml
緩沖液GB	15ml	50 ml
緩沖液GD	13 ml	52 ml
漂洗液PW	15ml	50 ml
洗脫緩沖液TB	15ml	30 ml
Proteinase K	1 ml	4×1 ml
RNase-Free吸附柱CR2	50個	200個
收集管（2 ml)	50個	200個
1.5 ml離心管	50個	200個

保存條件：室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存12個月，更長時間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時間，必要時可在37℃水浴中孵育10min，以溶解沉淀。

提樣本采集及存和運送：
1．樣本：按照濾紙干血斑采集方法進行采集。
2．樣本保存：經(jīng)上述采集的待測樣本可立即用于處理，或在密封，干燥（濕度低于30%），2～8℃條件下保存（此條件下可保存5年）。樣本運送時應(yīng)將濾紙干血斑密封，采用泡沫箱加冰運輸。

注意事項：（請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項)
1．若緩沖液GA或GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，搖勻后使用。
2．溶液使用后應(yīng)將瓶蓋擰緊，避免蒸發(fā)。
3．所有離心步驟均在室溫下離心。
4．若溶液與皮膚、粘膜接觸，請立即用自來水沖洗，對操作者不會造成傷害風(fēng)險

使用方法：
使用前請先在緩沖液GD和漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標(biāo)簽。

1．取三片3×3mm的干血斑樣品到1.5 ml的離心管（自備）中。
2．加入200μl的緩沖液GA。
3．加入20 μl Proteinase K溶液，渦旋震蕩10 sec混勻后，放入預(yù)熱至56℃的恒溫震蕩器中，900rpm恒溫震蕩1h。
4．短暫離心，加入200μl的緩沖液GB，震蕩10 sec充分混勻。將離心管放入預(yù)熱至70℃的恒溫震蕩器中，900rpm恒溫震蕩10min。孵育結(jié)束后簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的液滴。
  注意：加入緩沖液GB時可能會產(chǎn)生白色沉淀，一般70℃放置時會消失，不會影響后續(xù)實驗。如溶液未變清亮，說明細(xì)胞裂解不徹底，可能導(dǎo)致提取DNA量少和提取出的DNA不純。
5．加入100 μl的無水乙醇。如果室溫超過25℃，請將乙醇置冰上預(yù)冷。輕輕顛倒混勻樣品，室溫放置5 min，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的液滴。
6．將上一步所得溶液都加到一個吸附柱CR2中（吸附柱放入收集管中），12000rpm（~13400×g)離心30 sec，棄收集管廢液，將吸附柱CR2放回收集管中。
7．向吸附柱CR2中加入500 μl緩沖液GD（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12000rpm （~13400×g)離心30 sec，棄收集管廢液，將吸附柱CR2放回收集管中。
8．向吸附柱CR2中加入700 μl漂洗液PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12000rpm （~13400×g)離心30 sec，棄收集管廢液，將吸附柱CR2放回收集管中。
9．向吸附柱CR2中加入500 μl漂洗液PW，12000rpm （~13400×g)離心30 sec。棄收集管廢液。
10．將吸附柱CR2放回廢液收集管中，12000rpm （~13400×g)離心2 min，倒掉廢液。將吸附柱CR2置于室溫放置2-5 min，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
  注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實驗。
11．將吸附柱CR2轉(zhuǎn)入一個干凈的離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加20-50 μl洗脫緩沖液TB，室溫放置2-5 min，12000rpm（~13400×g)離心2 min，將溶液收集到離心管中。
  注意：洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于20 μl，體積過小影響回收效率。為增加基因組DNA的得率，可將離心得到的DNA溶液再次加入吸附柱CR2中，室溫放置2 min，12000rpm（~13400×g)離心2 min。洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)（可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍)，pH值低于7.0會降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。

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貨號	名稱	規(guī)格
BTN70603	土壤腐殖酸清除劑	250mL
BTN81101	柱式昆蟲DNA提取試劑盒	50次
BTN70903	一步法質(zhì)粒DNA提取試劑盒2.0	50次
BTN51203	非酶RNA清除劑1.0	1.5mL
BTN140405	細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品(10EU/支)	10支
WE0162	高純質(zhì)粒小提試劑盒	50次|200次
WE0163	高純質(zhì)粒中提試劑盒	50次

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名稱：紅細(xì)胞裂解液A型(核酸純化)
貨號：BTN60403
規(guī)格：250mL
本品用于快速裂解哺乳動物全血中的紅細(xì)胞而基本不破壞白細(xì)胞和其他淋巴細(xì)胞的完整性。由于紅細(xì)胞是血液的主要細(xì)胞成份，不含DNA和RNA，其所含血紅素能抑制PCR反應(yīng)，所以先用本產(chǎn)品裂解紅細(xì)胞，再提取基因組DNA或RNA 有助于提高所得樣品純度。

產(chǎn)品特點：
1.快速，一次處理只需要2-3分鐘。處理后提取血液DNA可以不需要酚/lǜ仿去蛋白質(zhì)。
2.高效，一次處理能裂解80%以上的哺乳動物紅細(xì)胞，一般樣品最多只需要處理兩次。
3.擴容性好，可以一次處理多達幾十毫升的樣品，也可以處理100μL的血液。
4. 兼容性好，可以與市場上大多數(shù)血液DNA提取試劑盒結(jié)合使用。

儲存條件：常溫運輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在裝有抗凝血液的離心管中，按1:1的比例加入紅細(xì)胞裂解液A型并輕柔顛倒混勻。
2. 5000-10000 g室溫離心2分鐘，小心吸棄棄上清。
3. 將細(xì)胞沉淀重懸于1/2 體積的紅細(xì)胞裂解液A型中，輕柔吹打混勻后5000-10000g室溫離心2分鐘。
4.沉淀即為去除了紅細(xì)胞的血液細(xì)胞，可以直接用于后續(xù)的實驗。

名稱：菌體內(nèi)毒素清除劑
貨號：BTN90901
規(guī)格：200mL
內(nèi)毒素是E.coli細(xì)胞壁的主要成分，傳統(tǒng)的去除內(nèi)毒素的方法是將內(nèi)毒素和DNA一起純化出來，然后再用各種方法去除其中的內(nèi)毒素，操作繁瑣，DNA 回收率低。本產(chǎn)品可以直接把E.coli 表面的內(nèi)毒素去除，從根本上避免了內(nèi)毒素對后續(xù)操作(如質(zhì)粒DNA提取，重組蛋白質(zhì)提取)的污染。

產(chǎn)品特點：
1. 首個在菌體收集階段去除內(nèi)毒素的產(chǎn)品，從源頭上避免了內(nèi)毒素跟DNA和胞漿蛋白的接觸，從根本上防止了可能產(chǎn)生的污染。
2. 操作簡單快速，用酶溶液溫和清洗菌體3-4次即可去掉細(xì)菌表面的內(nèi)毒素，只需要10分鐘左右時間，不需要復(fù)雜儀器設(shè)備。
3.高效，能去除99%以上的內(nèi)毒素。
4.跟各種質(zhì)粒DNA提取、基因組DNA提取和蛋白質(zhì)提取等操作兼容，DNA丟失率只有10%左右(其他方法DNA 丟失率可以高達50%)。
5. 不影響DNA和絕大部分蛋白質(zhì)的活性，處理過的質(zhì)粒DNA可用于轉(zhuǎn)染實驗。
6. 既可小規(guī)模使用(在1.5mL離心管內(nèi))，也可放量用于大規(guī)模無內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA提取和無內(nèi)毒素蛋白質(zhì)純化。

儲存條件：常溫運輸和保存，有效期一年。

使用方法：

一：用于菌液小于3mL的樣品
1. 收集1.5-3mL E.coli 飽和菌液，12000rpm離心1分鐘，棄上清，得到細(xì)菌沉淀。
2. 加入1mL 本產(chǎn)品溫和混勻后10,000-12000rpm離心1分鐘，棄上清(含內(nèi)毒素)。
3. 再重復(fù)上述操作3-4次，得到的菌體可以直接進入后續(xù)的無內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA提取或無內(nèi)毒素蛋白質(zhì)提取程序。

二：用于菌液多于3mL的樣品
整個操作同上，只是在15或50mL塑料離心管中進行，離心速度不能超過離心管的承受力，本產(chǎn)品的用量按比例增加。

疑難解答：
Q:為何用常規(guī)的方法很難去除生物樣品中的內(nèi)毒素?
A:因為內(nèi)毒素帶電性跟DNA和部分蛋白質(zhì)相同，所以基于帶電性的分離方法(如硅膠膜吸附，離子交換吸附)不能將它們分開;同時內(nèi)毒素又是雙性分子(類似于細(xì)胞膜的磷脂分子)，能夠形成大小不等的聚合物，跟質(zhì)粒DNA和蛋白質(zhì)大小接近，所以基于分子量大小的分離方法(如凝膠排阻過濾和氯化銫超速離心)也不能將其有效分離。