特別提示:包括電泳級(jí)耐熱型SYBR染料在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:電泳級(jí)耐熱型SYBR染料
英文名稱:SuperSYBR Green
產(chǎn)品貨號(hào):BTN61201
產(chǎn)品規(guī)格:50μL
本品是改良型的SYBR Green I,它跟常規(guī)的SYBR Green I相比檢測(cè)靈敏度相當(dāng),但具有耐熱、耐水解的特點(diǎn),所以十分穩(wěn)定,使用更加方便。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1. 穩(wěn)定,本產(chǎn)品濃縮液可以在常溫下存放一年以上,方便運(yùn)輸和保存。本產(chǎn)品的1X工作液在常溫下的半衰期為120 多天,比常規(guī)的SYBR Green I(5天)長(zhǎng)20倍以上。
2. 使用方便多樣,既可以在制備凝膠時(shí)加入到融化的瓊脂糖凝膠中,還可以象常規(guī)的SYBR Green I、SYBR Gold、SYBR safe、GelStar一樣用于電泳后染色。
3. 靈敏,其檢測(cè)靈敏度跟SYBR Green I相同,比EB 靈敏200-100倍。
4.低毒、環(huán)保、健康。
5.可檢測(cè)各種核酸分子,包括dsDNA、ssDNA、RNA和Oligo。
6. 兼容性好,不但與常用的TAE、TBE和5分鐘超快電泳緩沖液SuperBuffer-2等兼容,還與常用的UV 檢測(cè)系統(tǒng)和可見光激發(fā)檢測(cè)系統(tǒng)兼容。
7. 對(duì) DNA 泳動(dòng)速度的影響小于常規(guī)的SYBR Green I。
8. 半衰期長(zhǎng),自然損耗低,可多次使用,使其相對(duì)使用成本比常規(guī)的SYBR Green I和其它非對(duì)稱花青類染料低。
儲(chǔ)存條件:常溫運(yùn)輸保存(避光),保存期為一年。
本產(chǎn)品可以在電泳中染色,優(yōu)點(diǎn)是用量少,但如果與DNA的比例沒達(dá)到最佳時(shí),帶型容易彌散;也可以在電泳后染色,優(yōu)點(diǎn)是不會(huì)對(duì)DNA電泳產(chǎn)生干擾,但用量大,還需要額外的染色過程?蛻艨梢愿鶕(jù)需要選擇使用方法。百奧萊博不建議將本產(chǎn)品用于染色后再上樣(即先將其與DNA 混合然后再上樣),也不建議將其用于PAGE(因分子較大,難以進(jìn)入凝膠)。
使用方法之一:電泳中染色(僅適于瓊脂糖凝膠電泳)
1. 按常規(guī)方法制備瓊脂糖凝膠,膠中不能含任何其他染料。
2. 將按1:10000的比例將SuperSYBR 直接加到熔化的瓊脂糖凝膠中并充分搖晃均勻(5μl可以加入到50mL 熔化的瓊脂糖凝膠中),然后倒膠。
3.其余的上樣、電泳、UV 觀察等步驟按常規(guī)操作進(jìn)行。在254nm 紫外照射透視下,與雙鏈DNA 接合的SuperSYBR 呈現(xiàn)綠色熒光。拍照時(shí)最好使用綠色濾光片。如果使用300nm 紫外照射透視儀觀察也可以,但效果不如254nm。
4. 未用完的膠可以反復(fù)融化,如果保存時(shí)間在一周以上,最好閉光。
注意:本方法的靈敏度比在熔化的瓊脂糖凝膠中加EB染色的方法高,比電泳后染色經(jīng)濟(jì)(后者用量大)。SuperSYBR與DNA 結(jié)合同SYBR Green I跟DNA的結(jié)合一樣,有時(shí)會(huì)影響DNA樣品的相對(duì)遷移率。如果出現(xiàn)DNA電泳帶彌散的現(xiàn)象,說明SuperSYBR和DNA的比例沒達(dá)到最佳,可以適當(dāng)調(diào)節(jié)DNA的上樣量。
使用方法之二:電泳后染色
1. 按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。
2. 用水將10000×SuperSYBR 原液稀釋2500倍成4×工作液(如:將5μl SuperSYBR 原液加到10mL 水和2.5mL 5 M NaCl中,加NaCl的目的是促進(jìn)SuperSYBR與DNA的結(jié)合)。由于SuperSYBR 對(duì)玻璃和非聚丙烯材料具有一定親和力,故建議在稀釋、貯存、染色等使用過程中用聚丙烯類容器。
3. 將電泳后染色工作液倒入合適的聚丙烯容器中,放入凝膠,用鋁箔等蓋住容器使染料避光。室溫振蕩染色10-30分鐘,染色時(shí)間因凝膠濃度和厚度而定。
4.在 254nm紫外照射透視下,與雙鏈DNA 接合的SuperSYBR 呈現(xiàn)綠色熒光。拍照時(shí)最好使用綠色濾光片。如果使用300nm 紫外照射透視儀觀察也可以,但效果不如254nm。
注意:電泳后染色工作液可以冷凍避光儲(chǔ)存,可以在一個(gè)星期內(nèi)重復(fù)使用多次。
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每次加樣量為5μL,可用于相對(duì)定量。本系列產(chǎn)品與各種瓊脂糖和各種電泳緩沖液兼容。
儲(chǔ)存條件:低溫運(yùn)輸、-20℃保存,有效期一年。
使用方法:直接上樣電泳,每次加樣量為5uL。
使用效果:
疑難解答:
a)如對(duì)帶型要求較高,建議使用0.8-1.5%瓊脂糖凝膠(對(duì)SuperBuffer-2緩沖液,電壓為250-400V)或1.5-2.0%瓊脂糖凝膠(對(duì)TAE或TBE緩沖液,電壓為80V),同時(shí)適當(dāng)延長(zhǎng)電泳時(shí)間。
b)電泳圖象的質(zhì)量與瓊脂糖、電泳緩沖液有關(guān)。請(qǐng)采用高質(zhì)量的瓊脂糖,同時(shí)要經(jīng)常更換電泳緩沖液。
名稱:瓊脂糖
貨號(hào):YT019
規(guī)格:50g
本品為不含DNase、RNase和Protease的瓊脂糖,配制成的瓊脂糖凝膠的凝固點(diǎn)為 34-38℃,熔點(diǎn)為87-89℃。常用于配制核酸分析凝膠,例如用于DNA電泳的瓊脂糖凝膠、用于RNA電泳的瓊脂糖凝膠等。常使用TAE或TBE作為電泳液。
瓊脂糖凝膠的濃度和DNA電泳的分辨率及理想的電泳液參考下表。對(duì)于分辨率要求不高時(shí),使用TAE和TBE均可;對(duì)于分辨率要求比較高時(shí),對(duì)于較低濃度的膠和大分子量核酸宜使用TAE,對(duì)于較高濃度的膠和小分子量核酸宜使用TBE。
膠濃度(w/v) |
理想分離范圍 |
理想的電泳液 |
0.8% |
800-22,000 bp |
TAE |
1.0% |
500-10,000 bp |
TAE/TBE |
1.2% |
400-7,000 bp |
TAE/TBE |
1.5% |
250-5000 bp |
TAE/TBE |
2.0% |
150-3,000 bp |
TBE |
儲(chǔ)存條件:室溫。
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