油紅O染色試劑盒

特別提示：包括油紅O染色試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：油紅O染色試劑盒
英文名稱：Oil Red O Stain Kit
產(chǎn)品貨號：SY0586
產(chǎn)品規(guī)格：50ml

本油紅O染色試劑盒，其內(nèi)的染液安全無毒，對人體無傷害。操作簡單，性能穩(wěn)定，顯色清晰，且顏色對比鮮明且染色穩(wěn)定。染色切片保存時間長且不易褪色。

油性紅O（Oil Red O）是一種脂溶性偶氮染料，是很強的脂溶劑和染脂劑，能特異性地使組織和細胞內(nèi)中性甘油三脂、脂質(zhì)以及脂蛋白等染色。當組織切片置入染液時，染料則離開染液而溶于組織內(nèi)的脂質(zhì)（如脂滴）中，使組織內(nèi)的脂滴呈紅色。用于分析細胞樣品中脂質(zhì)狀況。油紅O染色法，由于其觀察性更好，染色更深，因此，目前已廣泛的替代了其他脂質(zhì)染色法，如蘇丹III、 染色法等。

油性紅O染色試劑盒，主要用于病理狀態(tài)下組織脂肪的檢測。正常情況下，除脂肪細胞外其他細胞內(nèi)一般不見或僅見少量脂滴。在病理狀態(tài)下這些細胞中出現(xiàn)脂滴或脂滴明顯增多，特別是在心、肝、腎等實質(zhì)器官發(fā)生脂肪變性時，胞漿內(nèi)出現(xiàn)大小不一的空泡，這時需用脂肪染色鑒定該空泡是否為脂肪變性；此外，脂肪染色還有其他多種用途：1）在動脈粥樣硬化時，用脂肪染色可檢測內(nèi)皮細胞下的脂質(zhì)沉著；2）顯示脂肪栓塞栓子內(nèi)的脂質(zhì)，從而確診脂肪栓塞；3）用于腫瘤組織的鑒別診斷，由脂肪組織所發(fā)生的腫瘤在與其他組織來源的腫瘤相區(qū)分時，可以借助脂肪染色，脂肪組織所發(fā)生的腫瘤，脂肪染色為陽性。

產(chǎn)品組份：
油紅O儲存液————50ml×1瓶
油紅O稀釋液————20ml×1瓶
復染液——————50ml×1瓶
水性封固劑————10ml×1瓶


注意事項
1）封片時不可用油溶性封固劑封片，即千萬不可用中性樹膠封片，只可用本產(chǎn)品所攜帶的水性封固劑封片，否則會影響脂類染色效果；
2）封片時片子不宜太干，否則易起氣泡，封片速度要快，防止凝固，發(fā)現(xiàn)有氣泡時不宜壓蓋玻片驅(qū)趕，這會使脂滴移位，若氣泡多，可用溫水浸掉蓋玻片后再封片。
3）乙醇、丙酮等脂溶劑均會影響對脂質(zhì)的保存，不宜用作封固劑；
4）水洗時水流不可太大；
5）染色液染色之前，樣本片盡量不要濕水；
6）切片時建議使用防脫載玻片，封片時建議使用免洗蓋玻片；
7）做油紅O染色時，冰凍切片要厚，一般為10-15µm，太薄的話脂肪會流失，可能造成假陰性結(jié)果；
8）配好的應(yīng)用液需用慢速濾紙過濾，防止染色時有雜質(zhì)；
9）油紅O染色時應(yīng)避免試劑揮發(fā)，否則易形成背景沉淀，樣本不同具體染色時間會有差異，根據(jù)自己的染色結(jié)果進行調(diào)整；
10）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

儲存條件：室溫，有效期12個月

根據(jù)您的關(guān)注的油紅O染色試劑盒，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：
 

貨號	名稱	規(guī)格
BTN121122	柱式探針純化試劑盒	10次
BTN91104B	Denhardt溶液(非同位素探針)	250mL
YT360	氯離子熒光探針(MQAE)	20mg
YT948	細胞內(nèi)鈣離子熒光探針(Fluo-4 AM)	25微升
KFS157	線粒體綠色熒光探針(tracker Green)	50μg
KFS159	線粒體綠色熒光探針	100μL
KFS164	JC-10(增強型JC-1)	1mg

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名稱：BLOTTO溶液
貨號：BTN100812
規(guī)格：250mL
BLOTTO全名是Bovine Lacto TransferTechnique Optimizer，是一種含有脫脂奶粉、磷酸鹽和抗菌劑的雜交阻斷劑，可以用于DNA雜交(Southern雜交、斑點雜交、菌落雜交)、Western雜交、ELISA；但不能用于RNA雜交和低拷貝的Southern雜交。也不能與含高濃度的SDS混用。

儲存條件：低溫運輸、-4℃保存(不能保存在-20℃)，有效期一年。

名稱：Denhardt溶液(非同位素探針)
貨號：BTN91104B
規(guī)格：250mL
本產(chǎn)品是最經(jīng)典的、用于核酸膜雜交時降低膜對標記探針的非特異結(jié)合的試劑，早在Southern雜交出現(xiàn)前10年由Denhardt發(fā)明，該產(chǎn)品可用與Southern(含單拷貝基因)、Northern、非同位素雜交(B型規(guī)格)，與硝酸纖維素膜、尼龍膜等各種常用的核酸雜交介質(zhì)兼容。A和B分別適用于同位素和非同位素探針。

儲存條件：低溫運輸、-20℃保存、有效期一年。

名稱：超級雜交液(含50%甲酰胺)
貨號：BTN80915B
規(guī)格：100mL
核酸雜交一般是指用一種標記的核酸探針與印跡膜上的核酸進行雜交，由此檢測印跡膜上是否存在與探針同源的核酸分子(靶分子)。核酸雜交是分子生物學的基本技術(shù)之一，應(yīng)用非常廣泛。由于核酸雜交效率受印跡膜種類、雜交溫度、探針濃度、雜交液離子強度、雜交液pH及雜交液粘度等因素影響，用戶自己摸索和優(yōu)化相關(guān)條件非常繁瑣，因此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品，其操作流程如下：


產(chǎn)品特點：
1. 既可用于Southern雜交(靶分子為DNA)，也可用于和Northern雜交(靶分子為RNA)，還可以用于菌落雜交，基因芯片等雜交。
2. 既可以用于同位素探針的雜交，也可以用于非同位素探針的雜交。
3. 既可以使用DNA(包括DNA Oligo)探針，也可以使用RNA探針(包括RNA Oligo)
4.含多種能夠促進雜交的聚合物，使雜交反應(yīng)能在6～12小時完成，而常規(guī)雜交反應(yīng)一般需要12～24小時。
5.含多種封堵劑，能阻印跡膜對探針分子的非特異性吸附，能有效降低背景信號，延長曝光時間以便檢測到低拷貝的RNA(Northern)和單拷貝的基因(Southern)。
6. A型不含甲酰胺，B型含50%的甲酰胺。后者使雜交在較低溫度就可以完成，適合Tm 較高的分子雜交(如RNA-RNA和RNA-DNA雜交)。
7.跟各種常用的印跡膜兼容，包括硝酸纖維素膜和尼龍膜。

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。本產(chǎn)品屬于高鹽溶液，低溫下產(chǎn)生沉淀，必須在65℃加熱溶解并充分搖勻后才能使用。

使用方法：

一、根據(jù)探針和靶分子的不同，分別按下面不同情況計算雜交分子的Tm 值
1. 對DNA-DNA雜交，其Tm = 81.5 + 16.6×log10[Na+] + 0.41×GC%–500/L
說明：L是探針或靶分子的長度(用兩者中最短的一個)
GC%是探針或靶分子中的GC 百分比(用兩者中最短的一個)
Na+濃度是本產(chǎn)品中Na+的濃度，為0.75 M，16.6 ×log10[Na+]=(-2.07)
2. 對DNA-RNA雜交，其Tm 值比DNA-DNA的Tm 值要高10-15℃。
3. 對RNA-RNA雜交，其Tm 值比DNA-DNA的Tm 值要高20-25℃。
4. 對Oligo探針雜交，Tm=GC 數(shù)量×4℃+AT 數(shù)量×2℃。

二、確定最佳雜交溫度(預雜交溫度跟雜交溫度應(yīng)該一樣)
1. 對于大于200bp的DNA-DNA雜交，最佳雜交溫度一般比Tm低15-25℃，一般選擇68℃。
2. 對RNA-RNA或DNA-RNA雜交，最佳雜交溫度一般比Tm低15-25℃。如果這樣計算出的雜交溫度很高(如高于70℃)，則RNA容易降解，所以最好選用含甲酰胺的超級雜交液(B型本產(chǎn)品)，以便能在42℃完成雜交。
3. 對Oligo探針的雜交，最佳雜交溫度一般比Tm低5℃。由于Oligo較短，更容易受各種因素影響(如錯配率、修飾堿基比例等)，所以最佳溫度需要適度摸索和優(yōu)化。

三、確定洗膜溫度
一般使用0.1×SSC做洗膜液，在此條件下的最佳洗膜溫度比Tm低5-12℃，一般情況下可以在55℃進行洗膜。Oligo探針可以室溫洗膜。

四、預雜交步驟
預雜交就是用不含探針的本產(chǎn)品跟印跡膜進行孵育，其目的是用所含的非特異性DNA分子(鮭精DNA或小牛胸腺DNA)及其它高分子化合物將印跡膜上會非特異地吸附探針分子的位點封閉，否則這些位點會吸附標記的探針，造成高背景。
1. 將結(jié)合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的6×SSC溶液中，使其充分濕潤。
2. 將濕潤的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋最好預先封口，再剪掉一角，留一個小口)，按每平方厘米印跡膜加0.2mL超級雜交液的比例沿小口加入超級雜交液，然后用塑料封口機將口封牢。
3. 將此塑料袋浸沒入溫度設(shè)定在最佳雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中，保溫1-2小時，延長到12-16小時亦可。注意保溫過程中塑料袋應(yīng)在不停的搖動狀態(tài)中，使超級雜交液與印跡膜充分接觸。

五、雜交步驟
1. 如果標記的探針是雙鏈核酸，則需經(jīng)變性處理。具體操作是將探針樣品在沸水浴中加熱5分鐘，然后迅速置冰浴中。如果是單鏈DNA或RNA探針，則不需變性，直接使用。
2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預雜交的雜交袋中(先用剪刀剪一小口，加入探針后用熱封機封口)。探針的加入量視探針標記效率而定，一般要求終濃度不能低于1-2 ng/mL。如果檢測基因組中的單拷貝基因，探針的加入量應(yīng)加大，而對于檢測克隆的基因片段，則探針的量可減少。如果是放射性探針，應(yīng)將此塑料袋套在另一塑料袋之中，以避免雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。
3.在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫，時間一般為6-12小時。

六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中，一定不要使印跡膜干燥。
此步是將與印跡膜非特異結(jié)合的探針分子洗去而只留下特異結(jié)合的探針分子。由于非特異性雜交的雜交分子解鏈溫度較低，熱穩(wěn)定性較差，在一定的溫度和較低的離子強度下，即可洗掉。
1.雜交完畢，取出塑料袋，剪去一角，倒出所有的含探針的雜交液。此含探針的雜交液可以多次使用再倒棄。
2. 剪開雜交袋，用鑷子取出印跡膜，浸沒于大量的2×SSC(含0.5%SDS)溶液中，室溫下振蕩漂洗15分鐘。
3. 重復上步操作一次。
4. 將印跡膜轉(zhuǎn)移至0.1×SSC(含0.1% SDS)溶液中，在計算好的洗膜溫度下振蕩漂洗30分鐘至1小時。
5. 重復上步操作一次。如果是同位素標記探針，則需要重復至用蓋革計數(shù)器在無核酸區(qū)域檢測不出放射信號為止。
6. 將印跡膜轉(zhuǎn)移到濾紙上，吸去表面液體后印跡膜即可用于后續(xù)檢測。

疑難解答：
問題一：高背景(有或沒有雜交信號)
解決方案：將放射性探針的比活降低到2×10E6 cpm/mL以下；將非放射性探針的終濃度降低到30 ng/mL以下；將探針長度控制在200–800 核苷酸；減少雜交時間；適當提高雜交溫度。
問題二：沒有雜交信號或雜交信號非常弱
解決方案：雜交過程中應(yīng)應(yīng)該連續(xù)振蕩，不應(yīng)該有氣泡，避免印跡膜變干。將放射性探針活性提高到>5×10E8 cpm/ng，提高非放射性標記探針的終濃度；適當降低雜交溫度。