明膠封閉緩沖液

特別提示：包括明膠封閉緩沖液在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：明膠封閉緩沖液
英文名稱：Gelatin Blocking Buffer
產(chǎn)品貨號(hào)：GS1592
產(chǎn)品規(guī)格：100mL|400mL

儲(chǔ)存條件：冷藏（2-8℃）不可凍存

概述

本產(chǎn)品專為封閉ELISA板孔或者包被抗原/抗體的乳膠顆粒設(shè)計(jì)，不含任何蛋白質(zhì)，可有效消除或降低潛在的蛋白質(zhì)污染引起的交叉反應(yīng)，封閉效率高，可有效保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度。使用前放在37℃預(yù)熱一下并混勻即可使用，不需要繁瑣的準(zhǔn)備。

應(yīng)用

用于封閉ELISA板孔或者包被抗原/抗體的乳膠顆粒



根據(jù)您的關(guān)注的明膠封閉緩沖液，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：



名稱：CHAPS
貨號(hào)：BTN131043
規(guī)格：5g
CHAPS全名是(3-[(3-Cholamidopropyl)dimethylammonio]-1-propanesulfonate)，中文名是3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽，多一個(gè)羥基就是CHAPSO，全名是3-[(3- 膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-2- 羥基-1- 丙磺酸鹽。它們的特點(diǎn)是能夠破壞非特異性蛋白相互作用。與非離子型去垢劑相比引起蛋白聚集的幾率更小。電中性并且不會(huì)引起變性�？梢酝ㄟ^透析去除。

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。

名稱：SDS-PAGE電泳液(干粉)
貨號(hào)：BTN81203
規(guī)格：5L
本產(chǎn)品為干粉型SDS-PAGE電泳液，加水配制后即可直接用于SDS-PAGE電泳，非常方便。

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。

名稱：考馬斯亮藍(lán)染色試劑盒(常規(guī)法)
貨號(hào)：YT056
規(guī)格：1盒
本品采用了最經(jīng)典的考馬斯亮藍(lán)染色和脫色方法，以考馬斯亮藍(lán)R250為染料，可用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白電泳凝膠的常規(guī)染色和脫色，或Western轉(zhuǎn)膜后PAGE膠上殘余蛋白的檢測。

使用本試劑盒，采用常規(guī)染色脫色方法累計(jì)時(shí)間達(dá)到2-3小時(shí)后可以觀察到蛋白條帶；采用快速染色脫色方法20分鐘左右即可觀察到蛋白條帶。觀察到最清晰的蛋白條帶則需染色脫色更長時(shí)間。本試劑盒中的染色液和脫色液經(jīng)過改良，不含有毒的甲醇，但含有刺激性氣味的乙酸。

試劑盒組分：
考馬斯亮藍(lán)染色液————————100ml
考馬斯亮藍(lán)染色脫色液——————500ml

儲(chǔ)存條件：室溫，有效期一年。

名稱：RIPA裂解液(強(qiáng))
貨號(hào)：WE0258
規(guī)格：100ml
  RIPA裂解液是一種傳統(tǒng)的組織以及細(xì)胞快速裂解液，主要用于從動(dòng)物組織和哺乳動(dòng)物細(xì)胞中抽取可溶性蛋白，可用于裂解貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。按照其裂解液的強(qiáng)度可以分為強(qiáng)、中、弱三類，具體特點(diǎn)和差異請(qǐng)參考附表2，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇相應(yīng)產(chǎn)品。RIPA裂解液(強(qiáng))可以有效提取細(xì)胞核、細(xì)胞膜和胞漿蛋白，提取的蛋白可應(yīng)用于蛋白定量、Western Blot、IP等檢測分析。
  RIPA裂解液(強(qiáng))的主要成分為50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1%Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等。


注意事項(xiàng)：
1、為防止蛋白降解，所有的操作盡量在冰上進(jìn)行。
2、使用RIPA裂解液得到的蛋白樣品，可采用BCA法進(jìn)行蛋白定量，以測定蛋白濃度。產(chǎn)品可單獨(dú)向本公司訂購，如：WE0276 BCA蛋白定量試劑盒。本品含有高濃度的去垢劑，不能用Bradford法進(jìn)行蛋白定量。
3、建議在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，以防止蛋白降解，或保持蛋白的磷酸化狀態(tài)。產(chǎn)品可單獨(dú)向本公司訂購，如：WE0259 蛋白酶抑制劑混合物，WE0256 磷酸酶抑制劑混合物。
4、若需獲得更高濃度的蛋白，應(yīng)減少哺乳動(dòng)物蛋白抽提試劑的使用量。
5、對(duì)于培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞，推薦先使用常規(guī)方法消化細(xì)胞，再參考懸浮細(xì)胞蛋白提取步驟操作。
6、對(duì)于離心獲得的細(xì)胞，若不確定細(xì)胞體積，可根據(jù)細(xì)胞數(shù)量計(jì)算RIPA裂解液的使用量。如5×106個(gè)Hela細(xì)胞約需加入500μl RIPA裂解液，以此類推。

使用方法：

一、細(xì)胞樣品
貼壁細(xì)胞蛋白抽提
1、小心傾去貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液。
2、可選步驟：若培養(yǎng)基中含有酚紅或其他可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的物質(zhì)，請(qǐng)先使用預(yù)冷的PBS漂洗細(xì)胞。
3．加入適量RIPA Lysis Buffer(Strong)(使用前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑)，試劑使用量請(qǐng)參考附表1，在冰上用槍頭吹打貼壁細(xì)胞。

表1 貼壁細(xì)胞RIPA 裂解液使用量推薦表

細(xì)胞培養(yǎng)板類型或培養(yǎng)面積	RIPA 裂解液使用量
100 mm	500-1000μl
60 mm	250-500μl
6孔培養(yǎng)板	200-400μl /孔
24孔培養(yǎng)板	100-200μl /孔
96孔培養(yǎng)板	50-100μl /孔

4、將裂解液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，冰上孵育20分鐘，使細(xì)胞充分裂解。
5、14000×g離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上清液至新管中，進(jìn)行下一步分析。

懸浮細(xì)胞蛋白提取
1、懸浮細(xì)胞，2,500×g離心5分鐘，棄去上清。
2、可選步驟：若培養(yǎng)基中含有酚紅或其他可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的物質(zhì)，請(qǐng)使用PBS漂洗細(xì)胞。漂洗后的細(xì)胞懸浮液2,500×g離心5分鐘，棄去上清。
3、加入適量RIPA Lysis Buffer(Strong)(使用前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑)，每5×106細(xì)胞加入約200-500μl RIPA Lysis Buffer(Strong)，吹打均勻。
4、冰上放置20分鐘，使細(xì)胞充分裂解。
5、14000×g離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上清液至新管中，進(jìn)行下一步分析。

二、組織樣品
1、取適當(dāng)?shù)腞IPA Lysis Buffer(Strong)，在使用前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑。
2、稱量實(shí)驗(yàn)組織的重量，按照1:10(g/ml)的比例加入RIPA Lysis Buffer(Strong)后將組織剪成細(xì)小碎片，用電動(dòng)勻漿器勻漿處理。若需要濃縮的蛋白提取物，可適當(dāng)減少組織蛋白抽提試劑使用量。
3、冰上孵育20分鐘，使細(xì)胞充分裂解。
4、14000×g 離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上清液至新管中，進(jìn)行下一步分析。
注：RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中可能會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為基因組。

表2 蛋白裂解液性能、參數(shù)比較
 

目錄號(hào)	WE0258	WE0257
名稱	RIPA裂解液(強(qiáng))	RIPA裂解液(中)	RIPA裂解液(弱)	SDS裂解液
裂解強(qiáng)度	強(qiáng)	中	溫和	強(qiáng)
有效裂解成分	1%Triton X-100， 1%脫氧膽酸鈉, 0.1% SDS	1% NP-40， 0.5%脫氧膽酸鈉 , 0.1% SDS	1% NP-40， 0.25%脫氧膽酸鈉	1%SDS
膜蛋白提取	很好	較好	一般	很好
胞漿蛋白提取	很好	很好	很好	很好
核蛋白提取	很好	較好	較好	很好
主要用途	WB，IP	WB，IP	WB，IP，CO-IP	WB，CHIP

儲(chǔ)存條件：2～8℃

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