COVID-19肽底物Covidyte IF670

COVID-19肽底物Covidyte IF670

冠狀病毒（CoV）是一種可以感染人類和多種動(dòng)物，因其形態(tài)看上去像中世紀(jì)歐洲帝王的皇冠，因此命名為“冠狀病毒”。這類病毒具有胃腸道、呼吸道和神經(jīng)系統(tǒng)的嗜性，可以導(dǎo)致多種疾病。在2019年底，一種新型的冠狀病毒被稱為嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒2（SARS-CoV-2），開始在全球蔓延。即使大多數(shù)受感染的患者僅患有輕度癥狀，例如發(fā)燒和咳嗽，但該疾病可能發(fā)展為致命的肺炎和急性呼吸衰竭病例，尤其是在多病體弱的的老人中。該病毒僅僅從出現(xiàn)開始的三四個(gè)月，全球已經(jīng)感染了超過100萬人。當(dāng)前，尚無用于治療Covid-19的任何具體有效的選擇。目前，Covid-19的臨床治療主要是對(duì)癥治療，并結(jié)合上市的抗病毒藥物（如瑞德昔韋和抗生素）以治療繼發(fā)感染。目前全世界都迫切需要開發(fā)抗SARS-CoV-2的特異性抗病毒治療方法和疫苗，而冠狀病毒主蛋白酶是抗CoV藥物設(shè)計(jì)的重要靶點(diǎn)，在病毒基因表達(dá)和復(fù)制中起著關(guān)鍵作用。目前已掌握的治療人類免疫缺陷病毒（HIV）和丙型肝炎的成功策略是抑制蛋白水解酶消滅病毒蛋白酶。而且證明了蛋白酶抑制劑治療病毒感染具有非常大的潛力。同樣，SARS-CoV-2病毒必須要進(jìn)行復(fù)制的酶便是蛋白酶，因此Covid-19是抗病毒治療極好的靶點(diǎn)。

Covidyte TF670是一種包含11個(gè)氨基酸序列的肽底物，可被冠狀病毒蛋白酶切割。FRET肽的"N"和"C"末端分別包含Dabcyl（淬滅劑）和Edans（供體），當(dāng)該肽完整時(shí)，Edans的熒光可被Dabcy有效地淬滅。當(dāng)該肽被冠狀病毒蛋白酶水解時(shí)，Edans片段產(chǎn)生明顯增強(qiáng)的熒光，因?yàn)槠錈晒獠辉俦籇abcyl淬滅。冠狀病毒蛋白酶的活性可以通過Edans的熒光強(qiáng)度有效地檢測(cè)到。Covidyte TF670是篩選冠狀病毒蛋白酶抑制劑的便捷工具。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Covidyte肽底物系列產(chǎn)品。 

樣品實(shí)驗(yàn)方案

溶液配制

儲(chǔ)備溶液配制

1.Covidyte TF670儲(chǔ)備液（200X）：向Covidyte TF670小瓶中添加25 µL（對(duì)于cat＃13540）或250 µL（對(duì)于cat＃13541）DMSO。

注意：制成單次使用的等分試樣，并儲(chǔ)存在-20°C下。

工作溶液配制

1.Covidyte TF670工作溶液：在20 mM Tris緩沖液（pH 7.5）或自備緩沖液中以1：200稀釋底物儲(chǔ)備液。每個(gè)實(shí)驗(yàn)在96孔板中使用50μL底物溶液。

2.冠狀病毒蛋白酶稀釋：根據(jù)需要稀釋冠狀病毒蛋白酶。

實(shí)驗(yàn)步驟

（一個(gè)96孔板的樣品方案）

1. 將50μLCovidyte TF670工作溶液和50μL冠狀病毒蛋白酶稀釋液添加到測(cè)定板的所有孔中。
2. 使用熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 640/680 nm（截止660nm）處檢測(cè)熒光的增加。 

對(duì)于動(dòng)力學(xué)讀數(shù)：立即開始連續(xù)不斷地測(cè)量熒光強(qiáng)度，并每5分鐘記錄一次數(shù)據(jù)，持續(xù)30-120分鐘。
對(duì)于終點(diǎn)讀數(shù)：在避光的條件下，將反應(yīng)在所需溫度下孵育30至120分鐘。然后測(cè)量熒光強(qiáng)度。
 

圖示

圖1蛋白酶在蛋白質(zhì)激活、細(xì)胞調(diào)節(jié)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以及氨基酸的生成中起著至關(guān)重要的作用，用于蛋白質(zhì)合成或其他代謝途徑。 FRET蛋白酶底物廣泛用于檢測(cè)蛋白酶活性，特別是用于病毒蛋白酶的檢測(cè)，這些病毒蛋白酶經(jīng)常需要較長(zhǎng)的肽序列才能實(shí)現(xiàn)結(jié)合，例如冠狀病毒，HIV和HCV蛋白酶。原理：內(nèi)部淬滅的FRET肽底物被蛋白酶消化，熒光強(qiáng)度與蛋白酶活性成正比，從而產(chǎn)生高熒光的肽片段。Tide Quencher、Tide Fluor 和iFluor 染料都是研發(fā)用于高通量篩選應(yīng)用的FRET蛋白酶底物的極其有效的淬滅劑。

相關(guān)產(chǎn)品