線粒體保存液

特別提示：包括線粒體保存液在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：線粒體保存液
英文名稱：Mitochondria Storage Buffer
產(chǎn)品貨號：YTB3309
產(chǎn)品規(guī)格：50ml

本制品是一種用于稀釋或保存具有生物活性線粒體的緩沖液，主要用于和百奧萊博的細(xì)胞線粒體分離試劑盒（貨號：YT043）、組織線粒體分離試劑盒（貨號：YT044）配套使用。

本制品稀釋或保存的線粒體能夠保證線粒體的完整性，不會破壞線粒體結(jié)構(gòu)。稀釋或保存的線粒體可用于后續(xù)完整線粒體的功能或酶活性研究，例如可以使用我司的線粒體膜電位檢測試劑盒(貨號：YT148)測定分離得到的線粒體的膜電位、western blot等。

保存條件：-20℃保存，一年有效。

注意事項：
 

• 由于分離線粒體的所有步驟均需在冰上或4℃進(jìn)行，所以本產(chǎn)品使用前融解后需冰浴或放于4℃預(yù)冷。


• 使用本制品稀釋或儲存的線粒體樣品應(yīng)及時使用，以免線粒體膜電位受影響。如果不能及時使用，建議在-80℃保存。凍存后的線粒體樣品不推薦用于膜電位的檢測，但可以用線粒體蛋白或核酸的相關(guān)檢測。

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名稱：植物葉綠體純化試劑盒
貨號：BTN120308
規(guī)格：15次
葉綠體是重要的，負(fù)責(zé)植物光合作用的細(xì)胞器，很多重要的特性(如雄性不育)也跟葉綠體相關(guān)，所以葉綠體是研究植物生理和母系遺傳的重要材料。對植物葉綠體進(jìn)行生化，遺傳和分子生物學(xué)研究都需要進(jìn)行葉綠體純化。本產(chǎn)品就是基于密度梯度離心的，專門用于從植物葉片中純化完整葉綠體的試劑盒。

產(chǎn)品特點：
1．即用型試劑盒，用戶不需要單獨配制各種溶液。
2．提供AB兩種選擇，A型用于葉綠體粗提，所得葉綠體含少量其他細(xì)胞器污染，可用于后續(xù)的SDS-PAGE，Western，ELSIA和蛋白組分析。B型用于葉綠體精提，所得葉綠體完整，可用于后續(xù)的光合作用，電子鏈和磷酸化，跨膜轉(zhuǎn)運，體外葉綠體蛋白合成，蛋白定位等研究。還可用于的葉綠體膜，基質(zhì)，類囊體，葉綠體DNA和葉綠體RNA純化。
3．本產(chǎn)品足夠15次提取，每次可處理30g葉片，能得到5mg左右葉綠體。
4．已經(jīng)成功用于菠菜，大豆，萵筍，白菜，煙草和甜菜等植物，還可用于更多植物(可能需要優(yōu)化條件)。


試劑盒組成：
 

成分	規(guī)格
溶液A成分一	250ml×2
溶液A成分二(干粉)	3g
溶液B	60ml
帶柄尼龍濾膜	1個
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸，4℃保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：葉綠體對溫度高度敏感，所以整個操作必須在冰上或者在冷室進(jìn)行，所用器皿和溶液均需要在4℃預(yù)冷。離心時一定要在4℃進(jìn)行，離心力以g而不是rpm計算。如果需要研究葉綠體的功能，提取過程還需要在昏暗的光線條件下進(jìn)行。

1．實驗前1-2天將植物放在暗室培養(yǎng)以減少葉綠體中淀粉顆粒的形成，否則離心時這些顆粒很容易使葉綠體破裂。葉片在實驗前需先用自來水洗凈，再用蒸餾水淋洗，去掉多余水分。如果葉片采集后不能立即處理，則保存時需要保持葉片濕潤，即使如此，葉片的放置時間也不能超過一天。
2．新鮮(實驗當(dāng)天)制備溶液A：將自備的去離子水與溶液A成分一按4：1的比例混合，然后在混合液中加入溶液A成分二干粉到終濃度0.1%(每100mL中加入0.1g干粉)，搖晃溶解后所得溶液即為溶液A，冰上預(yù)冷待用。一次實驗(從30 g葉片提取葉綠體)所需要的溶液A體積跟材料不同而不同。
3．新鮮采集植物葉片，快速去除葉脈并將葉片剪成1-3cm2大小的碎片并浸泡在適量的預(yù)冷的溶液A中(每克葉片加4mL溶液A，但對煙草和大豆，每克葉片需要加6mL溶液A)。
4．將浸泡了葉片的溶液A轉(zhuǎn)移到Waring勻漿機(jī)(即家用制備果汁的勻漿機(jī))中，低速勻漿10秒，避免起泡沫。用玻璃棒把液面的碎片按入勻漿機(jī)底部后，再低速勻漿10秒。注意：除Waring勻漿機(jī)外，還可以選擇Dounce玻璃勻漿器，Polytron勻漿機(jī)和研磨(加玻璃珠)等裂解細(xì)胞的方法，但這些方法的單次處理量都比較小，需要將樣品分成很多小份單獨勻漿，然后再匯集。
5．用帶柄尼龍濾膜過濾勻漿液，可先將濾液收集到預(yù)冷的200mL量筒中，再等分到4個預(yù)冷的50mL的塑料離心管中(每個管中的濾液不要超過35mL)。帶柄尼龍濾膜后可反復(fù)使用。
6．在水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)上4℃ 200g離心3分鐘(對菠菜，白菜和萵筍材料)或400g離心1分鐘(對甜菜材料)，白色沉淀為未破裂的細(xì)胞或細(xì)胞核。
7．將上清液(含葉綠體)轉(zhuǎn)移到一個新的、預(yù)冷的50mL塑料離心管中。
8．在水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)上4℃ 1000g離心7分鐘，小心棄上清，沉淀含葉綠體，呈淺綠色。
9．在沉淀中加入1.5mL預(yù)冷的溶液A，手彈離心管底部使葉綠體重懸。注意：重懸時最好避免溶液起泡，也不要用槍頭吹打，否則葉綠體容易破裂。沉淀下有白色淀粉屬于正�，F(xiàn)象，但重懸葉綠體時避免將白色淀粉重懸。
10．將4管葉綠體重懸液匯集(共約6mL)。此溶液為葉綠體粗提產(chǎn)物，可直接用于后續(xù)的SDS-PAGE，Western，ELISA和蛋白組分析。如果需要以之為材料精提葉綠體，就需要將破裂的葉綠體和完整的葉綠體分開，根據(jù)植物的不同，可選用下述兩種密度梯度離心法之一進(jìn)行分離。
11．單濃度分離法(適合菠菜，白菜和萵筍等材料)：
a)在50mL塑料離心管中先加入6mL溶液A成分一和4mL溶液B，充分混合均勻。
b)在其液面上小心鋪上第11步匯集得到的約6mL葉綠體重懸液。
c)在水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)上4℃ 1000g離心8分鐘，最上層的綠色帶含破碎的葉綠體，線粒體和核糖體等，管底的綠色沉淀為完整的葉綠體。
d)小心將上清倒出后，在葉綠體沉淀中加入預(yù)冷的0.5mL溶液A成分一，手指輕彈管底使之重懸。
e)將葉綠體重懸液轉(zhuǎn)移到1.5mL離心管中并避光保存�？稍谙嗖铒@微鏡下檢查葉綠體完整性。葉綠體必須盡快使用，否則非常容易失去活性。
12．雙濃度分離法(適合煙草，甜菜和大豆等材料)：
a)在14mL塑料離心管中先加入0.5mL溶液A和2mL溶液B，充分混合均勻，得密度梯度重液。
b)在另一試管中將3mL溶液A和2mL溶液B充分混合均勻，得密度梯度輕液。
c)將密度梯度輕液小心鋪在密度梯度重液之上，然后將第10步匯集得到的葉綠體重懸液中的4mL(還剩下2mL)小心鋪在密度梯度輕液之上。
d)在水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)上4℃ 3200g離心15分鐘，最上層綠色帶含破碎的葉綠體、線粒體和核糖體等，重液和輕液間的綠色帶為完整葉綠體。
e)用廣口吸管小心將重液和輕液之間的綠色帶(葉綠體)轉(zhuǎn)移到新的離心管中，加入三倍體積的預(yù)冷的溶液A成分一，輕柔混勻。
f)在水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)上4℃ 1700g離心1分鐘，小心將上清倒出后，在綠色的葉綠體沉淀中加入預(yù)冷的0.5mL溶液A成分一，手指輕彈管底使之葉綠體重懸。
g)將葉綠體重懸液轉(zhuǎn)移到1.5mL離心管中并避光保存，也可在相差顯微鏡下檢查葉綠體完整性。葉綠體必須盡快使用，否則非常容易失去活性。所得精提葉綠體可用于后續(xù)的光合作用，電子鏈和磷酸化，跨膜轉(zhuǎn)運，體外葉綠體蛋白合成，蛋白定位等研究。還可用于的葉綠體膜，基質(zhì)，類囊體，葉綠體DNA和葉綠體RNA純化。