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人膀胱成纖維細(xì)胞
英文名稱(chēng):人膀胱成纖維細(xì)胞總訪問(wèn):1
國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口:國(guó)產(chǎn)半年訪問(wèn):1
產(chǎn)地/品牌:澳睿賽生物產(chǎn)品類(lèi)別:細(xì)胞株/菌種
規(guī)       格:詳見(jiàn)說(shuō)明 最后更新:2025-7-2
貨       號(hào):ORCH073
參考報(bào)價(jià):7384
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人膀胱成纖維細(xì)胞
Human bladder fibroblasts
一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱(chēng)
人膀胱成纖維細(xì)胞
組織來(lái)源
膀胱組織
商品貨號(hào)
ORCH073
種屬來(lái)源
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡(jiǎn)介
人膀胱成纖維細(xì)胞分離自膀胱組織;膀胱是一個(gè)儲(chǔ)尿器官,在哺乳類(lèi)動(dòng)物,它是由平滑肌組成的一個(gè)囊形結(jié)構(gòu),位于骨盆內(nèi),其后端開(kāi)口與尿道相通。膀胱與尿道的交界處有括約肌,可以控制尿液的排出。膀胱壁由三層組織組成,由內(nèi)向外為黏膜層、肌層和外膜。肌層由平滑肌纖維構(gòu)成,稱(chēng)為逼尿肌,逼尿肌收縮,可使膀胱內(nèi)壓升高,壓迫尿液由尿道排出。在膀胱與尿道交界處有較厚的環(huán)形肌,形成尿道內(nèi)括約肌。在括約肌收縮能關(guān)閉尿道內(nèi)口,防止尿液自膀胱漏出。膀胱壁分為三層:即漿膜層(蜂窩脂肪組織)、肌肉層(逼尿肌、膀胱三角區(qū)肌)和黏膜層(極薄的一層移行上皮組織)。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)。成纖維細(xì)胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),在一定條件下,它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化;成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的膀胱成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,其中部分開(kāi)始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起;6h后細(xì)胞基本貼壁完全,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長(zhǎng),不聚集成團(tuán);細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),細(xì)胞排列緊密,有的交叉重疊生長(zhǎng),平坦、胞體較大,細(xì)胞質(zhì)透明,細(xì)胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細(xì)胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。膀胱成纖維細(xì)胞分泌的生長(zhǎng)因子是一種具有多功能的促有絲分裂原,研究已表明其參與惡性腫瘤的形成過(guò)程。近年來(lái),堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子在膀胱癌發(fā)病過(guò)程中的作用、與生物學(xué)行為之間的關(guān)系以及治療上的應(yīng)用已受到重視。
培養(yǎng)基
含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率
每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性
貼壁
細(xì)胞形態(tài)
成纖維細(xì)胞樣
傳代特性
可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
傳代比例
1:2
消化液
0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件
氣相:空氣,95%;CO2,5%
 
方法簡(jiǎn)介:澳睿賽實(shí)驗(yàn)室分離的人膀胱成纖維細(xì)胞采用胰蛋白酶 - 膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):澳睿賽實(shí)驗(yàn)室分離的人膀胱成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以
上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
人膀胱成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用澳睿賽配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
 
二、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片
三、使用方法
人膀胱成纖維細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)呈纖維細(xì)胞樣,在澳睿賽技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,細(xì)胞可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)最佳;建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化;
3)用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);
4)待細(xì)胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。          
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min);消化完向離心管內(nèi)加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化;
3)經(jīng)1000rpm,離心5min,丟棄上清,用5ml完全培養(yǎng)基重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi);
4)待細(xì)胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時(shí),需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn);包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴(lài)氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細(xì)胞種類(lèi)而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。
四、注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和澳睿賽技術(shù)部溝通;由于運(yùn)輸?shù)脑,個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決。
5. 該細(xì)胞只可用于科研。
1)本產(chǎn)品未通過(guò)直接用于活體動(dòng)物和人的審核
2)本產(chǎn)品未通過(guò)用于活體診斷的審核 
備注:由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同,以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考

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