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| 銷售商： 澳睿賽生物技術(shù)（上海）有限公司 | 查看該公司所有產(chǎn)品 >> |
人外周血單個核細(xì)胞
Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC
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一、細(xì)胞基本屬性
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細(xì)胞名稱
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人外周血單個核細(xì)胞
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組織來源
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外周血
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商品貨號
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ORCH158
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種屬來源
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人
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產(chǎn)品規(guī)格
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5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
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細(xì)胞簡介
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人外周血單個核細(xì)胞分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計劃中首次提出外周血這一新概念。外周血單個核細(xì)胞(PBMC)即外周血中具有單個核的細(xì)胞，包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。目前，主要的分離方法是密度梯度離心法，因為血液中各有形成分的比重存在差異，因此得以分離出不同的細(xì)胞。
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培養(yǎng)基
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含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
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換液頻率
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每2-3天換液一次
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生長特性
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半貼半懸浮
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細(xì)胞形態(tài)
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圓形
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傳代特性
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不增殖；不傳代
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傳代比例
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不傳代
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消化液
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0.25%胰蛋白酶
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培養(yǎng)條件
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氣相：空氣，95%；CO2，5%
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方法簡介：澳睿賽實驗室分離的人外周血單個核細(xì)胞采用取外周血、通過密度梯度離心法制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測：澳睿賽實驗室分離的人外周血單個核細(xì)胞經(jīng)經(jīng)過檢測，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
人外周血單個核細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用澳睿賽配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
二、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細(xì)胞電子版照片
三、使用方法
人外周血單個核細(xì)胞是一種半貼半懸浮細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈圓形，在澳睿賽技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞不增殖；不傳代；建議您收到細(xì)胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 半貼壁半懸浮細(xì)胞處理
1)收集T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50ml離心管中，用吸管吸取PBS，吹洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶1-2次，收集清洗液；經(jīng)1200-1500rpm離心3min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀①；
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，收集細(xì)胞懸液至離心管中；經(jīng)1200-1500rpm離心3min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀②；
4)吸取5ml新鮮完全培養(yǎng)基，重懸細(xì)胞沉淀①、細(xì)胞沉淀②,把①、②混勻。
5)用吸管輕輕吹打混勻、分散細(xì)胞，按實驗需求接種于實驗器皿內(nèi)，然后補充適量新鮮的完全培養(yǎng)基，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
6)待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，用于實驗；可以每2-3天換液一次新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml完全培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實驗
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
四、注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和澳睿賽技術(shù)部溝通；由于運輸?shù)脑�，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
5. 該細(xì)胞只可用于科研。
1)本產(chǎn)品未通過直接用于活體動物和人的審核
2)本產(chǎn)品未通過用于活體診斷的審核
備注：由于實驗所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實驗室參考
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