單克隆抗體的生產(chǎn)

產(chǎn)生針對(duì)特定抗原的大量靶向抗體的過(guò)程。單克隆抗體是通過(guò)稱(chēng)為雜交瘤的特定細(xì)胞的多個(gè)/相同拷貝產(chǎn)生的。為了產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，需要將2個(gè)細(xì)胞融合，以便將2個(gè)細(xì)胞的特征結(jié)合到1個(gè)細(xì)胞中。其中一種細(xì)胞是生產(chǎn)細(xì)胞抗體，它是來(lái)自實(shí)驗(yàn)室小鼠的B淋巴細(xì)胞，另一種是腫瘤細(xì)胞，稱(chēng)為骨髓瘤。腫瘤細(xì)胞具有無(wú)限生長(zhǎng)的能力，并且以超過(guò)正常細(xì)胞生長(zhǎng)的速度生長(zhǎng)。Laboratroy生產(chǎn)的雜交瘤細(xì)胞比正常的抗體生產(chǎn)細(xì)胞復(fù)制快得多，并且單個(gè)雜交瘤無(wú)限期地生產(chǎn)特異性抗體。

雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生初由B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的特異性單克隆抗體。原始B淋巴細(xì)胞將產(chǎn)生單克隆抗體，這取決于在收獲B淋巴細(xì)胞之前注射入小鼠的抗原種類(lèi)。一個(gè)小例子是，如果給老鼠注射某種病毒，老鼠體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生特定的病毒抗體。與腫瘤細(xì)胞融合產(chǎn)生雜交瘤，導(dǎo)致產(chǎn)生針對(duì)特定病毒的單克隆抗體。

雜交瘤細(xì)胞被置于能幫助它們生長(zhǎng)并產(chǎn)生大量單克隆抗體的培養(yǎng)基中。培養(yǎng)單克隆抗體有兩種方法，一種是在實(shí)驗(yàn)室燒瓶中培養(yǎng)，即體外培養(yǎng)，另一種是在小鼠的胃壁中培養(yǎng)。將雜交瘤注射到小鼠體內(nèi)是獲取單克隆抗體的常見(jiàn)方法。該方法通過(guò)將來(lái)自用所需抗原免疫的小鼠的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞混合來(lái)完成。骨髓瘤細(xì)胞需要失去合成HGPRT酶(次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶)的能力，該酶使細(xì)胞能夠利用細(xì)胞外的次黃嘌呤源作為前體來(lái)合成嘌呤。細(xì)胞有另一種合成嘌呤的途徑，因此缺乏HGPRT對(duì)細(xì)胞來(lái)說(shuō)不是問(wèn)題，但當(dāng)細(xì)胞暴露于氨基蝶呤時(shí)，它們不能利用這種其他途徑，完全依賴(lài)HGPRT生存。總而言之，未融合的骨髓瘤細(xì)胞不能生長(zhǎng)，因?yàn)樗鼈內(nèi)狈�HGPRT，未融合的正常脾細(xì)胞也不能生長(zhǎng)，因?yàn)樗鼈兊膲勖�有限。雜交瘤細(xì)胞無(wú)限生長(zhǎng)，因?yàn)槠⒓?xì)胞伴侶提供HGPRT，而骨髓瘤伴侶是永生的。

步是將細(xì)胞融合混合物轉(zhuǎn)移到含有次黃嘌呤、氨基蝶呤和嘧啶胸苷的HAT培養(yǎng)基中。2釹步是檢測(cè)每種培養(yǎng)物的上清液，以確定產(chǎn)生所需抗體的位置。必須從每個(gè)抗體陽(yáng)性培養(yǎng)物中分離出單細(xì)胞，并對(duì)其進(jìn)行傳代培養(yǎng)，這代表其抗體是單克隆的克隆。每個(gè)單細(xì)胞培養(yǎng)物分泌一種特定類(lèi)型的抗體，該抗體針對(duì)特定的決定簇/選擇的抗原。3注冊(cè)營(yíng)養(yǎng)師步是擴(kuò)大成功克隆的培養(yǎng)規(guī)模。雜交瘤培養(yǎng)物可以在體外培養(yǎng)容器中無(wú)限生長(zhǎng)，產(chǎn)量為15-65 g/ml，在體內(nèi)使用小鼠，血清中的抗體濃度為0.5-15 mg/ml。在過(guò)去的幾年里，世界范圍內(nèi)的動(dòng)物福利活動(dòng)家正試圖限制使用老鼠來(lái)生產(chǎn)單克隆抗體。當(dāng)單克隆抗體產(chǎn)生時(shí)，它可以用作探針來(lái)追蹤、結(jié)合和純化誘導(dǎo)其形成的特定蛋白質(zhì)。

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