細胞培養(yǎng)注意事項（二）

（一）如何避免細胞污染

細胞污染的種類可分成細菌、真菌、霉菌、病毒等。主要的污染原因為無菌操作技術不當、操作室環(huán)境不佳、污染的血清和污染的細胞等。嚴格無菌操作技術、清潔的環(huán)境、與品質良好的細胞來源和培養(yǎng)基配制是減低污染的最好方法。

（二）支原體 （mycoplasma）污染的細胞， 對細胞培養(yǎng)有何影響

不能以肉眼觀察出支原體污染異狀。除極有經(jīng)驗的專家外，大多數(shù)遭受支原體污染的細胞株，無法以其外觀分辨。

支原體污染幾乎可影響所有細胞的生長參數(shù)，代謝及研究任一數(shù)據(jù)。故進行實驗前，必須確認細胞為 mycoplasma-free，實驗結果的數(shù)據(jù)方有意義。

（三）培養(yǎng)基保存于 4 ℃ 冰箱中，顏色會偏暗紅色，且 pH 值會越來越偏堿性

培養(yǎng)基保存于 4 ℃ 冰箱中，培養(yǎng)基內的 CO₂ 會逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性，而培養(yǎng)基中的酸堿指示劑 （通常為 phenol red）的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿的結果，將造成細胞生長停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時，可以通入無菌過濾 CO_{2 ，}以調整 pH 值�；蛩釅A調PH。

（四）L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？

L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)時是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細胞的能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解，L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成，而氨對于一些細胞具有毒性。

（五）什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅？培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么？

酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為 PH 值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。

丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。