DNA擴增試劑盒說明書
DNA 擴增試劑盒說明書
【試劑名稱】 DNA 擴增試劑盒
【 目 錄 號 】 051011M
【產(chǎn)品保存】 -18~-25℃，有效期為 12 個月
【包裝規(guī)格】 48 測試
【產(chǎn)品簡介】本產(chǎn)品為 DNA 擴增試劑盒，可用于人源性、動植物源性病原體及其他細菌、真菌、病毒、寄生蟲等核酸的快速擴增。本試劑
盒通過 Bst 聚合酶、四種核苷酸單體（dNTPs）、引物等成分的作用，在恒溫條件下（60～65℃）快速、特異地完成核酸擴增，通過
儀器判讀結(jié)果。
【主要組成成份】
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組分名稱 |
規(guī)格Χ數(shù)量 |
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反應(yīng)液 RM-SCI |
630 μlΧ1 支 |
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Bst 聚合酶 Bst-SCI |
55 μl×1 支 |
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熒光染料 CS-SCI |
40 μl×1 支 |
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密封液 OIL-SCI |
1 mlΧ1 支 |
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超純水 DW-SCI |
1 mlΧ1 支 |
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對照引物 PM（引物混合物） |
20 μl×1 支 |
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PM-SCI |
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陽性對照 PG-SCI |
20 μl×1 支 |
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陰性對照 NG-SCI |
20 μl×1 支 |
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說明書 |
1 份 |
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使用指南實時熒光法
【適用儀器】ZYD-S1，熒光 PCR 儀（ABI 7500，CFX 96，Mx 3005P，LineGene 9600），Deaou-308c，Genie II 等擴增儀。
【檢驗方法】
1． 反應(yīng)體系的配制。（在試劑準(zhǔn)備區(qū)進行，冰上操作）
推薦擴增反應(yīng)體系（見表 1，以 25 μl 為例）
表 1 反應(yīng)體系參考
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組分名稱 |
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加入量 |
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建議加入量 |
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反應(yīng)液 RM-SCI |
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12.5 μl |
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12.5 |
μl |
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內(nèi)引物（FIP/BIP） |
（終濃度） |
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0.4～1.6 μM |
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1.0 |
μl |
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外引物（F3/B3） |
（終濃度） |
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0.1～0.2 μM |
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(引物 PM) |
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環(huán)引物（LF/LB）(可選) （終濃度） |
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0.1～0.8 μM |
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Bst 聚合酶 |
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1.0 μl |
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1.0 |
μl |
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熒光染料 |
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0.5 μl |
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0.5 |
μl |
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DNA 模板 |
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1～100 ng |
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2.0 |
μl |
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加超純水至 |
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25 μl |
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25 μl |
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上述試劑混勻后，加入一滴密封液，混勻離心，蓋緊管蓋。
2．LAMP 擴增反應(yīng)。（在擴增區(qū)進行）
將上述反應(yīng)管放入 60～65℃的擴增儀內(nèi)，反應(yīng) 20～60 min 后取出反應(yīng)管（反應(yīng)溫度及時間根據(jù)具體情況而定；試劑盒對照品
最佳擴增溫度為 63℃，最佳反應(yīng)時間為 60 min）。
使用熒光 PCR 儀，請選用 FAM 通道，反應(yīng)程序設(shè)置可參考圖 1，將 63℃ 15 s，63℃ 45 s 作為一個循環(huán)，于 63℃ 45 s 處收
集熒光信號。使用其他儀器請按照儀器說明書操作。
圖 1 熒光 PCR 儀反應(yīng)程序設(shè)置圖
3．結(jié)果檢測
若有“S”型擴增曲線，則判斷為陽性（有核酸擴增），若無“S”型擴增曲線，則判斷為陰性（無核酸擴增），見圖 2。
圖 2 檢測結(jié)果示意圖【注意事項】
實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套，建議使用帶濾芯的吸頭。
試劑使用前要完全解凍，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，建議使用前離心 30 秒。
實驗請按實驗室區(qū)操作，試劑配制等步驟請嚴(yán)格按照說明書的要求在冰上操作。
陽性對照品最適擴增溫度為 63℃，最適反應(yīng)時間為 60 min，提高或降低反應(yīng)溫度將影響擴增效率，延長擴增時間可能會出現(xiàn)非特異性擴增。
反應(yīng)結(jié)束后，開蓋易造成氣溶膠污染，切忌開蓋。
不同批號試劑請勿混合使用，請在有效期內(nèi)使用試劑盒。
本試劑盒僅供科研使用，請勿用于其他用途。
