細胞增殖方法

2. 每孔加入10微升CCK-8溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200微升，則需加入20微升CCK-8溶液，其它情況以此類推。可以用加了相應(yīng)量細胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。如果擔(dān)心所使用的藥物會干擾檢測，需設(shè)置加了相應(yīng)量細胞培養(yǎng)液、藥物和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。
3. 在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育0.5-4小時，對于大多數(shù)情況孵育1小時就可以了。時間的長短根據(jù)細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定，初次實驗時可以在0.5、1、2和4小時后分別用酶標儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續(xù)實驗。
4. 在450nm測定吸光度。如無450nm濾光片，可以使用420-480nm的濾光片。可以使用大于600nm的波長，例如650nm，作為參考波長進行雙波長測定。
5. 將不同數(shù)量的HeLa細胞按照每孔100微升培養(yǎng)液接種到96孔板中，培養(yǎng)至細胞貼壁充分后，每孔加入10微升的CCK-8溶液孵育2小時后測定A450的檢測效果圖參考圖2。檢測效果僅供參考，實測數(shù)據(jù)會因檢測儀器等的不同而存在差異。

圖2. CCK-8試劑盒測定不同數(shù)量HeLa細胞的檢測效果圖。實測數(shù)據(jù)會因檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。

常見問題：
1. CCK-8溶液對細胞的毒性大小如何？
CCK-8溶液對細胞的毒性非常低，通常觀察不到細胞毒性。細胞在CCK-8法檢測后仍然可以正常生長，并可以用于其它的細胞實驗。但為了避免CCK-8溶液可能帶來的對于后續(xù)檢測的影響，除非該細胞極難獲得，否則不推薦把CCK-8溶液孵育過的細胞用于其它實驗。
2.如果吸光度值太低，可以采取什么辦法？
a.適當(dāng)增加細胞數(shù)量。
b.延長加入CCK-8溶液后的孵育時間。