可視細胞共培養(yǎng)實驗的操作方法

在本方案中，我們將用于兩種不同細胞類型的共培養(yǎng)。供體細胞和受體細胞可以單獨生長，但共享相同的培養(yǎng)基以通過可溶性因子/蛋白質進行通訊。
 

1. 打開µ-Slide 2孔共培養(yǎng)載玻片的包裝，并將其放在µ-Slide架子或其他合適的表面上。準備您的受體細胞，并使用40-60 µl細胞懸液將其接種到中央小孔中。根據您的細胞，我們建議5-10 x104 cell/ ml。

2. 準備您的供體細胞，并將其接種到外部小孔中，每孔使用40-60 µl細胞懸液。當使用ibiTreat（經過親水性組織培養(yǎng)處理）表面時，外部8個孔之間可能會發(fā)生一些混合。不要用培養(yǎng)基潤濕內孔的走道，并小心處理玻片，以免在細胞附著之前混合培養(yǎng)基。

3. 細胞附著后，清空各個孔溶液以防止細胞混合。用40-60 µl培養(yǎng)基洗滌9個小孔，以去除非貼壁細胞。之后，將400- 600 µl培養(yǎng)基填充到每個大孔中。這將連接9個小孔，從而允許兩種細胞通過培養(yǎng)基進行通訊。

µ-Slide 2孔共培養(yǎng)載玻片還允許在凝膠基質內培養(yǎng)細胞球體，并與接種在外孔中的供體細胞結合。在下面的圖片中，有一個多細胞球狀體，例如內皮細胞嵌入膠原蛋白凝膠中。在中心小孔中生長的球狀體可以在癌細胞附近培養(yǎng)，這些癌細胞可以釋放出可溶性因子。像膠原I型凝膠這樣的水性3D凝膠基質不會阻礙分子擴散。

與ibidi Culture-Insert 2孔一起進行2D共培養(yǎng)，ibidi Culture-Insert 2孔可用于將不同類型的細胞鋪到一個培養(yǎng)容器中，彼此相鄰。它僅用作在指定區(qū)域播種細胞的模具。去除培養(yǎng)插件后，不同的細胞類型會彼此緊鄰而無障礙地生長。

µ-Slide共培養(yǎng)，可以創(chuàng)建單個細胞模式。根據所使用的板或培養(yǎng)皿，可以單獨選擇細胞數量和培養(yǎng)基體積。

在3D矩陣中共同培養(yǎng)細胞

ibidi micro-Insert 4孔提供了小孔，可以填充混合到3D凝膠基質中的細胞。這樣，可以在共享一個液體的同時分別培養(yǎng)不同類型的懸浮或貼壁細胞。可以根據需要收集或交換，而無需將細胞沖洗出凝膠。