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實(shí)驗(yàn)室操作技能匯總-免疫熒光玻片如何檢測(cè)和觀察

瀏覽次數(shù):2180 發(fā)布日期:2022-4-21  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

什么是免疫熒光技術(shù)?

免疫熒光技術(shù)(Immunofluorescence technique)又稱熒光抗體技術(shù),是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。

免疫熒光方法中主要步驟:

1)冰凍切片制備                2)組織切片固定     3)血清封閉                4)一抗孵育條件

5)二抗孵育條件                6)復(fù)染                  7)封片                        8)切片清洗

熒光顯微鏡標(biāo)本制作要求:

1、載玻片:載玻片厚度應(yīng)在0.8~1.2mm之間,載玻片必須光潔,厚度均勻,無(wú)明顯自發(fā)熒光,有時(shí)需用石英玻璃載玻片。

2、蓋玻片:蓋玻片厚度在0.17mm左右,光潔。

3、標(biāo)本:組織切片或其他標(biāo)本不能太厚,如太厚激發(fā)光大部分消耗在標(biāo)本下部。另外,細(xì)胞重迭或雜質(zhì)掩蓋,影響判斷。

4、封裱劑:封裱劑必須無(wú)自發(fā)熒光,無(wú)色透明,熒光的亮度在pH8.5~9.5時(shí)較亮,不易很快褪去。

5、鏡油:必須使用無(wú)熒光鏡油。

熒光玻片如何來(lái)檢測(cè)呢?

熒光顯微鏡是利用一個(gè)高發(fā)光效率的點(diǎn)光源,經(jīng)過(guò)濾色系統(tǒng)發(fā)出一定波長(zhǎng)的光(如紫外光365nm或紫藍(lán)光420nm)作為激發(fā)光、激發(fā)標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)發(fā)射出各種不同顏色的熒光后,再通過(guò)熒光顯微鏡來(lái)觀察。

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