實(shí)驗(yàn)室操作技能匯總-免疫熒光玻片如何檢測(cè)和觀察

什么是免疫熒光技術(shù)？

免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescence technique）又稱熒光抗體技術(shù)，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。

免疫熒光方法中主要步驟：

1）冰凍切片制備                2）組織切片固定     3）血清封閉                4）一抗孵育條件

5）二抗孵育條件                6）復(fù)染                  7）封片                        8）切片清洗

熒光顯微鏡標(biāo)本制作要求：

1、載玻片：載玻片厚度應(yīng)在0.8～1.2mm之間，載玻片必須光潔，厚度均勻，無(wú)明顯自發(fā)熒光，有時(shí)需用石英玻璃載玻片。

2、蓋玻片：蓋玻片厚度在0.17mm左右，光潔。

3、標(biāo)本：組織切片或其他標(biāo)本不能太厚，如太厚激發(fā)光大部分消耗在標(biāo)本下部。另外，細(xì)胞重迭或雜質(zhì)掩蓋，影響判斷。

4、封裱劑：封裱劑必須無(wú)自發(fā)熒光，無(wú)色透明，熒光的亮度在pH8.5～9.5時(shí)較亮，不易很快褪去。

5、鏡油：必須使用無(wú)熒光鏡油。

熒光玻片如何來(lái)檢測(cè)呢？

熒光顯微鏡是利用一個(gè)高發(fā)光效率的點(diǎn)光源，經(jīng)過(guò)濾色系統(tǒng)發(fā)出一定波長(zhǎng)的光(如紫外光365nm或紫藍(lán)光420nm)作為激發(fā)光、激發(fā)標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)發(fā)射出各種不同顏色的熒光后，再通過(guò)熒光顯微鏡來(lái)觀察。

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