蛋白磷酸化介紹和信號分子磷酸化的意義

1. 蛋白質磷酸化標志著蛋白質的信號激活，這是蛋白磷酸化的最基本的概念。蛋白質的磷酸化決定蛋白質的構建和活性，影響著細胞內的訊息傳遞過程，以對外在刺激作出適當反應。

2. 蛋白激酶負責體內蛋白質的磷酸化，它和負責蛋白質的脫磷酸化的蛋白質脫磷酸化酵素有著相對的功能。

3. 人類基因組內共含有大約500個蛋白激酶基因，占人類基因組的大約2%。

那么信號分子（蛋白）磷酸化的意義又是什么呢？

如果一個普通蛋白沒有磷酸化情況下，那么它的信號通路是關閉的狀態(tài)，當上游的ATP和蛋白激酶的幫助下，使得這個蛋白進行了磷酸化修飾，使得蛋白變構，處于一個激活狀態(tài)，然后信號通路傳遞至下游，然后再通過磷酸酵素的作用脫掉這個磷酸基團，又處于一個非激活狀態(tài)，然后由此循環(huán)。一般就是磷酸化越強，那么其信號激活就越強。

Western blot：

蛋白免疫印跡是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中經(jīng)常使用的一種實驗方法。利用特定抗體能夠專一結合其抗原蛋白質的原理來對樣品進行著色，通過分析著色的位置和著色的深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中的表達情況的信息，來分析檢測特定蛋白質的生物學檢測技術。

那么蛋白印在膜上后，用一抗二抗來識別，那么識別的分子越多呢，其條帶就會越濃，需要注意的是，使用一抗的抗體的時候，最好選用識別磷酸化的抗體，而不是識別普通的抗體，因為磷酸化的蛋白才是被激活的蛋白。

至于抗體的選擇呢，一般是通過文獻來確定，或者一些比較大的抗體公司網(wǎng)站去比對。例如，Biocompare里，在抗體篩選里面，還能查看所選抗體的評價，或許能對自己的實驗提供一些意見和幫助。

在選擇抗體的時候呢，可以選擇多抗抗體，也可以選擇單抗抗體，因為多抗和單抗抗體在Western的使用上沒有很明顯的差別，反而有時候多抗的選擇會出現(xiàn)比選擇單抗還要好一些的情況，可能的缺點是會出現(xiàn)較多的雜帶的風險，這個就需要和自己所需要的實驗進行一個平衡。