BMG酶標儀使用教程系列：如何優(yōu)化微孔板讀板機的增益設置

瀏覽次數(shù)：2374　發(fā)布日期：2023-8-25　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

你知道嗎？
增益設置是影響微孔板讀數(shù)機測量范圍的主要參數(shù)，即讀板機可以量化的最亮和最暗強度之間的比率。

你知道嗎？
增益設置具有人為設置的范圍。不同制造商的讀板機之間的這個范圍不同，這妨礙了測量值的直接比較。
然而，最大增益總是代表最高可能的信號放大。

吸光度、熒光和發(fā)光是基于微孔板的測定中最常用的三種檢測方法。與吸光度不同，熒光和發(fā)光不是絕對測量，而是取決于一個稱為“增益”的人工參數(shù)。

但增益設置是什么？它究竟如何影響你的測量？簡單地說，增益設置調節(jié)微孔板讀板機的測量范圍。這是一個定義微孔板讀板機檢測系統(tǒng)對入射光信號放大的因素。

圖1：微孔板讀板機的動態(tài)范圍

高增益設置提供了大的光信號放大，適用于產(chǎn)生弱信號的樣本。相反，低增益設置放大的樣本信號較少，適用于產(chǎn)生非常強的光信號的樣本。因此，為所測試出樣本選擇適當?shù)脑鲆嬖O置對于獲得最佳結果至關重要。

圖2：增益設置對標準曲線的影響

在該案例中，在不同的增益設置下測量熒光基團標準曲線（1pM至100nM）。通過微孔板讀板機自動確定的最佳增益為589。增益設置高于最佳值589（比如增益700和900的曲線）導致檢測器在高樣品濃度下過飽和。如果出現(xiàn)過飽和，數(shù)據(jù)點將被記錄并顯示為可能的最高值（本讀板機是260000）。雖然低于最佳值589的增益設置（比如增益500和增益550的曲線）解析了標準曲線的所有數(shù)據(jù)點，但較低標準樣品和空白樣品之間的區(qū)分越來越困難。

不適當?shù)脑鲆嬖O置將對數(shù)據(jù)質量、分析窗口和靈敏度產(chǎn)生負面影響。如果用高增益測量強信號的樣本，這可能導致檢測器飽和導致數(shù)據(jù)不可用（圖2）。相反，如果用低增益檢測微弱信號，它們可能與背景噪聲無法區(qū)分（圖3A）。如果您想比較多個測試的數(shù)據(jù)，建議在保持相同實驗條件的同時，對每次測量使用相同的增益設置。

你知道嗎？
通過對全板進行增益調整，微孔板讀板機識別出定義的板布局中產(chǎn)生最強光信號的孔，并相應地調整增益設置。

圖3：增益設置對信號強度（A）和信噪比（B）的影響

增益從最佳值（增益589）設置得越低，100nM熒光團標準的值（藍色柱；圖3A）將越接近空白樣品的值（橙色柱；圖3A）。相反，當使用高于最佳增益設置時，空白樣品的測量值接近過飽和值和100nM熒光團標準樣品值。最佳增益設置提供了最佳的信噪比，這是數(shù)據(jù)質量的一個重要指標。當遠離最佳增益時，該比率相應地減�。▓D3B）。

你知道嗎？
VANTAstar®和CLARIOstar®Plus讀板機上的增強動態(tài)范圍（EDR）功能可用于在整個測量過程中連續(xù)自動調整增益設置。

如何調整BMG LABTECH讀板機的增益設置？

BMG LABTECH讀板機的增益設置可以在選擇測試程序后，即測量開始前進行調整。只需選擇一個樣本孔（或多個孔）進行增益調整，選擇固定范圍（增益），然后單擊“開始調整”按鈕。

一般來說，增益調整應在預期產(chǎn)生最強光信號的樣本孔上以90%的目標值執(zhí)行。通過這種方式，可以適當?shù)赜涗浐兔枥L測量的所有數(shù)據(jù)點。然而，這并不總是可行的，因為在動力學測量中產(chǎn)生的光信號可能隨時間而變化。在這種情況下，建議將空白樣品的讀值的10%作為起點。測量的目標值（請參閱“如何調整BMG讀板機的增益設置”）可以以1%的增量進行調整，以微調記錄信號的強度。

由于當使用低于最佳值的增益設置時，測試樣品的測量值與空白值變得越來越難以區(qū)分，因此測定的檢測限（LOD）相應地受到影響并增大。在這個例子中，可以使用589的最佳增益設置來獲得3.9 pM的LOD，而將增益設置降低到300時已經(jīng)將LOD增加到481.3 pM。越低的增益設置會導致測量數(shù)據(jù)與線性度的進一步偏差，低于300的增益值會導致靈敏度的進一步降低，通常不建議使用。

結論
增益設置是為您的分析選擇最佳測量窗口的一個重要參數(shù)。如果設置正確，增益設置將增強信號與背景的比率以及測量靈敏度，并確保測試的所有數(shù)據(jù)點都被正確記錄。

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