AOPI熒光染色法：細胞活率分析的標準化解決方案
關于AOPI熒光染色法
AOPI熒光染色原理
AOPI試劑由AO（Acridine Orange，吖啶橙）和PI（Propidium iodide，碘化丙啶）組成。其中，AO是一種異染性熒光陽離子染料，可滲透細胞膜，并嵌入所有細胞（活細胞和死細胞）的細胞核，檢測到綠色熒光。PI不能通過完整的細胞膜，只能進入死細胞的細胞膜，并嵌入死細胞的細胞核，檢測到紅色熒光。當AO、PI試劑均存在于細胞中，在合適的染料配比下，染料間會發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移，致活細胞被激發(fā)出綠色熒光，死細胞被激發(fā)出紅色熒光。
使用CytScop系列智能細胞計數(shù)儀經(jīng)AOPI染色后獲得的代表性細胞圖像
傳統(tǒng)操作步驟
AOPI熒光染色法標準化的基石：微流控+AI模型
CytScop®Pro智能細胞計數(shù)儀通過微流控芯片全自動染色混勻、AI算法自動識別分析樣品，無需手動移液、染色、混勻、上樣、細胞活率分析等操作，實現(xiàn)全自動標準化細胞樣品活率分析，消除主觀因素對檢測結(jié)果的影響。檢測完成一個樣品后，自動清洗，確保樣品之間的檢測一致性，提高結(jié)果的可靠性和重復性。
自動染色&混勻：AOPI染料集成于芯片流道，細胞懸液注入后自動溶解混合，消除人工配液誤差；專利的微米級通道設計使得樣品混勻過程保持樣品的完整性；使得儀器液路系統(tǒng)更加精簡，用戶在日常操作中所需給設備清潔和維護工作量大幅降低。
雙熒光+明場大視野光學系統(tǒng)成像
CytScop的光學專利技術利用細胞與其周圍水介質(zhì)之間的微小折射率差異來增強細胞與其類似的透明溶液中產(chǎn)生高效的對比度。這種技術方法在明場模式下，能夠突出細胞的外觀形態(tài)和局部特征均能產(chǎn)生明顯的差異，具有非常好的立體感和極佳的細節(jié)表現(xiàn)能力。系統(tǒng)在暗場熒光下，系統(tǒng)能夠收集更多的熒光信號，從而增強不同波長的熒光特異性。
CytScop®的AI模型能夠更科學地識別細胞凋亡/團簇團聚等復雜情況；模型運行時，不再需要人為設置各種參數(shù)閾值如直徑、亮度、圓度、系數(shù)等，對不同的細胞類型/生物工藝具有良好的可拓展性與更準確的泛化能力，使得分析結(jié)果更加準確。
綜上所述，基于AOPI熒光染色法并結(jié)合CytScop®細胞計數(shù)儀的自動化分析，為細胞治療產(chǎn)品的細胞活率分析提供了一個高精度、標準化的解決方案。通過完全自動化操作生成的客觀、可量化、可追溯數(shù)據(jù)，為GMP合規(guī)性提供了堅實保障；其強大的細胞類型兼容性，使其能有效適應不同來源、形態(tài)各異的復雜細胞樣本，覆蓋從中間過程控制及工藝評估等關鍵工藝步驟；同時，微流控技術的創(chuàng)新應用顯著降低的樣本消耗量，使其對自體細胞等珍貴的治療性細胞樣本尤為友好，為細胞產(chǎn)品研發(fā)和生產(chǎn)提供更加準確、高效、便捷的細胞計數(shù)和分析解決方案。
