NK細胞培養(yǎng)存在的問題與解決方法

NK細胞，您培養(yǎng)的怎么樣
 

自然殺傷細胞(natural killer cell，NK)是機體重要的免疫細胞，不僅與抗腫瘤、 抗病毒感染和免疫調(diào)節(jié)有關，而且在某些情況下參與超敏反應和自身免疫性疾病的發(fā)生。

目前，NK細胞培養(yǎng)存在兩種培養(yǎng)方式：

1、滋養(yǎng)層細胞（人腫瘤細胞，即人白血病K562細胞）培養(yǎng)方式。
首先獲得具有不分裂不增殖但仍保持代謝活性的滋養(yǎng)層細胞。該細胞通過基因工程技術進行改造，再經(jīng)過鈷60輻照，細胞膜表面穩(wěn)定表達多種細胞因子，在多種細胞因子協(xié)同作用下，外周血單個核細胞中的自然殺傷細胞得到定向激活和擴增。

該種培養(yǎng)方式的價格相對便宜，僅有3000元左右。從培養(yǎng)結(jié)果來看，細胞收獲量可達到20億/L的水平，NK表型陽性率達到80%-90%左右。

2、純因子細胞培養(yǎng)方式。
顧名思義就是使用相應的細胞因子來刺激單個核細胞，向NK細胞方向誘導，并配合相應的細胞培養(yǎng)基，使NK細胞大量增殖。純因子細胞培養(yǎng)技術以其安全性高而著稱，其原因在于所使用的細胞因子，都是體內(nèi)環(huán)境原本就存在的。培養(yǎng)過程相當于模擬體內(nèi)環(huán)境，促進NK細胞的激活及大量增殖。

從培養(yǎng)結(jié)果來看，細胞收獲量可達到15-25億/L的水平，NK表型CD3-CD56+達到40%-90%左右。日本在該項技術上走在國際前列。由于日本老齡化嚴重，因此抗衰老研究較多。NK細胞在抗衰老研究中的應用符合其嚴格的風險管理原則。因此國內(nèi)使用的純因子試劑盒多進口自日本。但由于技術壁壘，純因子試劑盒的價格一直居高不下，多在6000元以上。

但從培養(yǎng)結(jié)果來看，滋養(yǎng)層細胞培養(yǎng)方式性價比更高，但由于在培養(yǎng)過程中選用的滋養(yǎng)層細胞為腫瘤細胞，用戶對此種培養(yǎng)方式實際是心存排斥的。盡管從理論上講，經(jīng)過相應處理的腫瘤細胞已經(jīng)不再具備增殖的可能性，但其潛在風險難以證明可以完全排除。另外，就是倫理方面的問題，將正常細胞與腫瘤細胞共培養(yǎng)，然后將培養(yǎng)后的NK細胞回輸體內(nèi)，確實存在難以克服的倫理障礙。正如上述原因，確實制約了滋養(yǎng)層培養(yǎng)技術的推廣。
2016年，某國產(chǎn)品牌在生物谷細胞治療會議中推出國內(nèi)首款NK純因子培養(yǎng)產(chǎn)品，兩年間，300多家用戶對該產(chǎn)品的評價差異極大：大部分覺得很好，可以得到滿意的結(jié)果；一部分覺得不太好，因為不是所有樣本的培養(yǎng)結(jié)果都讓人滿意，總是有某些樣本的細胞數(shù)量少或者NK表型低。

經(jīng)與用戶深入溝通，友康生物發(fā)現(xiàn)結(jié)果不理想的主要原因是某些樣本在培養(yǎng)的前半程（7天之前）密度上升緩慢，用戶難以貫徹廠家的補液原則。培養(yǎng)液不是補多了就是補得少，那結(jié)果會怎樣呢？

1、培養(yǎng)液補得多。培養(yǎng)液補多了，則NK細胞的密度更低，細胞生長更加緩慢，導致在2天后新的補液時點到來時，密度更加達不到補液要求。

2、培養(yǎng)液補得少。補液補少了，NK細胞生長過程中的代謝產(chǎn)物無法充分稀釋，整個培養(yǎng)環(huán)境變得有毒害，導致NK細胞密度更加難以上升。這類樣本，有的用戶2L培養(yǎng)體系僅能收到10億-20億的細胞數(shù)量。僅為正常值的15%-30%，給用戶造成了極大的困擾。

這種現(xiàn)象，在廠家看來是有些客戶尚未能完全掌握NK細胞的培養(yǎng)技巧導致。但站在用戶的角度來說，如果廠家在產(chǎn)品設計環(huán)節(jié)能夠做到不需要用戶面對NK細胞前期生長緩慢的情況，是不是就可以大幅減少甚至完全避免用戶的操作錯誤呢？是不是就可以大幅提升用戶自己的培養(yǎng)結(jié)果嗎？

結(jié)果是肯定的。于是友康生物根據(jù)客戶的反饋，重新設計了NK前期培養(yǎng)中的激活、擴增等環(huán)節(jié)的技術處理，推出2018版NK純因子培養(yǎng)產(chǎn)品。即便是狀態(tài)比較差的樣本，也可以在培養(yǎng)前期（7天之前）達到一個較高的生長密度，跳過了需要極其豐富經(jīng)驗才可正確應對的在細胞密度過低時的補液要求。

此次產(chǎn)品升級的不是該產(chǎn)品的理論性能，即廠家的技術人員或經(jīng)驗豐富的客戶技術人員可以達到的培養(yǎng)結(jié)果；而是該產(chǎn)品的實際性能——客戶的經(jīng)驗不太豐富的技術人員可以達到的培養(yǎng)結(jié)果�？蛻舻募夹g人員僅僅需要按照廠家給出的補液原則常規(guī)補液即可，不會再遇到前7天細胞生長密度達不到理論密度的情況。極大降低了NK培養(yǎng)難度，大幅提升了該產(chǎn)品在客戶處的培養(yǎng)結(jié)果：50ml外周血或50ml臍帶血，均可達到40-60億/2L的細胞總數(shù)，60-90%的CD3-CD56+陽性率的培養(yǎng)結(jié)果。

外周血NK細胞倍增曲線：
細胞總數(shù)44.2億/2L 體系；CD3-CD56+：72.0%


臍帶血NK細胞倍增曲線：
細胞總數(shù)40.8億/2L 體系；CD3-CD56+：63.1%


另外，針對客戶提出的培養(yǎng)瓶與培養(yǎng)袋的組合困惑問題，友康生物在機理方面進一步明晰了NK細胞培養(yǎng)全程中培養(yǎng)瓶與培養(yǎng)袋之間接力培養(yǎng)的工藝細節(jié)與陷阱，給出了明確無誤、結(jié)果可信的操作指導，將指導用戶避開培養(yǎng)失敗陷阱，可大幅提供用戶的培養(yǎng)成功率，為用戶的業(yè)務拓展奠定堅實的產(chǎn)品基礎。

（本文系轉(zhuǎn)載，原文地址：http://news.bioon.com/article/6726722.html）