蛋白磷酸化介紹和信號(hào)分子磷酸化的意義

1. 蛋白質(zhì)磷酸化標(biāo)志著蛋白質(zhì)的信號(hào)激活，這是蛋白磷酸化的最基本的概念。蛋白質(zhì)的磷酸化決定蛋白質(zhì)的構(gòu)建和活性，影響著細(xì)胞內(nèi)的訊息傳遞過(guò)程，以對(duì)外在刺激作出適當(dāng)反應(yīng)。

2. 蛋白激酶負(fù)責(zé)體內(nèi)蛋白質(zhì)的磷酸化，它和負(fù)責(zé)蛋白質(zhì)的脫磷酸化的蛋白質(zhì)脫磷酸化酵素有著相對(duì)的功能。

3. 人類基因組內(nèi)共含有大約500個(gè)蛋白激酶基因，占人類基因組的大約2%。

那么信號(hào)分子（蛋白）磷酸化的意義又是什么呢？

如果一個(gè)普通蛋白沒(méi)有磷酸化情況下，那么它的信號(hào)通路是關(guān)閉的狀態(tài)，當(dāng)上游的ATP和蛋白激酶的幫助下，使得這個(gè)蛋白進(jìn)行了磷酸化修飾，使得蛋白變構(gòu)，處于一個(gè)激活狀態(tài)，然后信號(hào)通路傳遞至下游，然后再通過(guò)磷酸酵素的作用脫掉這個(gè)磷酸基團(tuán)，又處于一個(gè)非激活狀態(tài)，然后由此循環(huán)。一般就是磷酸化越強(qiáng)，那么其信號(hào)激活就越強(qiáng)。

Western blot：

蛋白免疫印跡是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中經(jīng)常使用的一種實(shí)驗(yàn)方法。利用特定抗體能夠?qū)Ｒ唤Y(jié)合其抗原蛋白質(zhì)的原理來(lái)對(duì)樣品進(jìn)行著色，通過(guò)分析著色的位置和著色的深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中的表達(dá)情況的信息，來(lái)分析檢測(cè)特定蛋白質(zhì)的生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)。

那么蛋白印在膜上后，用一抗二抗來(lái)識(shí)別，那么識(shí)別的分子越多呢，其條帶就會(huì)越濃，需要注意的是，使用一抗的抗體的時(shí)候，最好選用識(shí)別磷酸化的抗體，而不是識(shí)別普通的抗體，因?yàn)榱姿峄�的蛋白才是被激活的蛋白�?/span>

至于抗體的選擇呢，一般是通過(guò)文獻(xiàn)來(lái)確定，或者一些比較大的抗體公司網(wǎng)站去比對(duì)。例如，Biocompare里，在抗體篩選里面，還能查看所選抗體的評(píng)價(jià)，或許能對(duì)自己的實(shí)驗(yàn)提供一些意見(jiàn)和幫助。

在選擇抗體的時(shí)候呢，可以選擇多抗抗體，也可以選擇單抗抗體，因?yàn)槎嗫购蛦慰箍贵w在Western的使用上沒(méi)有很明顯的差別，反而有時(shí)候多抗的選擇會(huì)出現(xiàn)比選擇單抗還要好一些的情況，可能的缺點(diǎn)是會(huì)出現(xiàn)較多的雜帶的風(fēng)險(xiǎn)，這個(gè)就需要和自己所需要的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行一個(gè)平衡。