Echo Revolve顯微鏡在上皮性卵巢癌研究中的應(yīng)用

導(dǎo)讀

上皮性卵巢癌是所有婦科惡性腫瘤中死亡率最高的。轉(zhuǎn)移是卵巢癌患者預(yù)后不良的主要原因。表觀遺傳和蛋白質(zhì)翻譯后修飾在腫瘤轉(zhuǎn)移中起重要作用。作為 IIa 類組蛋白去乙酰化酶的成員，組蛋白去乙酰化酶 9 (HDAC9) 通過使組蛋白和非組蛋白去乙�；瘏⑴c許多生物過程。

吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)系病理生物學(xué)重點實驗室的研究人員在Biomedicines上發(fā)表了題為《HDAC9 Contributes to Serous Ovarian Cancer Progression through Regulating Epithelial–Mesenchymal Transition》的文章。文中應(yīng)用Echo Revolve Generation 2顯微鏡進行免疫熒光的成像。

研究亮點：

▶   對A2780 和 SKOV3 細胞中FOXO1的免疫熒光染色圖像的觀察發(fā)現(xiàn)， HDAC9的變化對FOXO1易位和核積累的影響，還展示了FOXO1在A2780和SKOV3中的亞細胞定位。

▶  對A2780 和 SKOV3 細胞中 β-連環(huán)蛋白的免疫熒光染色的觀察發(fā)現(xiàn)，HDAC9的變化對β-連環(huán)蛋白易位和核積累的影響，還展示了β-連環(huán)蛋白在A2780和SKOV3中的亞細胞定位。

▶ 免疫熒光成像清晰準確，底噪干擾小，自動進行多通道結(jié)果合成，快速得到共定位的merge圖像。

文中所有的免疫熒光結(jié)果均是使用Echo Revolve Generation 2顯微鏡進行的快速清晰的成像，揭示了HDAC9的調(diào)整對FOXO1蛋白和β-連環(huán)蛋白的亞細胞定位的影響，進而發(fā)現(xiàn)HDAC9可能通過上調(diào) TGF-β 信號（HDAC9 可能通過增加 FOXO1 的核積累來促進 TGF-β 的表達）傳導(dǎo)促進 SKOV3 細胞中的 EMT以及HDAC9 可通過抑制 β-連環(huán)蛋白信號傳導(dǎo)抑制 A2780 細胞中的 EMT。

研究成果：

▲ 圖1.HDAC9 調(diào)節(jié)FOXO1蛋白在 SKOV3 細胞中的亞細胞定位。（A）Western blotting測定A2780和SKOV3細胞中FOXO1的表達。( B , C ) 轉(zhuǎn)染24 h后，通過Western blot檢測A2780和SKOV3細胞中FOXO1的表達。( D , E ) A2780 和 SKOV3 細胞轉(zhuǎn)染 24 h 后 FOXO1 免疫熒光染色。（bar = 30μm）。( F , G )轉(zhuǎn)染24 h后，分離A2780和SKOV3細胞核，檢測FOXO1的表達情況。( H )Western blotting檢測HDAC3在A2780和SKOV3細胞中的表達。

在漿液性卵巢癌中，過表達的 HDAC9 可以增加 FOXO1 的核定位并促進 TGF-β 的表達。HDAC9 激活 EMT 并促進細胞遷移，這可能是由于 FOXO1/TGF-β 軸的激活。相反，在非漿液性卵巢癌中，過表達的 HDAC9 可能通過減少 β-catenin 的核積累和 β-catenin 在 Lys-49 處的乙酰化來抑制 EMT。

▲ 圖2.HDAC9 可通過抑制 β-catenin 信號傳導(dǎo)來抑制 A2780 細胞中的 EMT。用 HDAC9 過表達構(gòu)建體、HDAC9-shRNA 質(zhì)粒 (siHDAC9-1/2) 或空載體轉(zhuǎn)染 A2780 和 SKOV3 細胞 24 小時。( A , B ) A2780 和 SKOV3 細胞中 β-連環(huán)蛋白的免疫熒光染色 (bar = 30 um)。( C )分離A2780和SKOV3細胞核，研究β-catenin的表達。( D )Western blot檢測A2780和SKOV3細胞中β-catenin和ac-β-catenin(Lys-49)的表達。

原文鏈接如：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC8962438/

期刊介紹：

Biomedicines是一份國際、科學(xué)、同行評審、開放獲取的生物醫(yī)學(xué)期刊，每月由 MDPI 在線出版。主要致力于人類健康和疾病研究的各個方面、新治療靶點的發(fā)現(xiàn)和表征、治療策略以及自然驅(qū)動的生物醫(yī)學(xué)、藥物和生物制藥產(chǎn)品的研究。最新影響因子4.757，5年影響因子5.225。