抗豬瘟病毒（CSFV）單克隆抗體的制備及應(yīng)用場(chǎng)景

瀏覽次數(shù)：208　發(fā)布日期：2025-6-19　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

一、基本概念

抗豬瘟病毒（Classical Swine Fever Virus, CSFV）單克隆抗體（Monoclonal Antibody, mAb）是通過雜交瘤技術(shù)制備的，能特異性識(shí)別 CSFV 表面抗原表位的單一抗體分子，具有高度特異性和均一性，在豬瘟診斷、病毒研究及相關(guān)生物制品開發(fā)中具有重要應(yīng)用價(jià)值。

二、制備流程
（一）抗原制備

CSFV 毒株選擇：常用強(qiáng)毒株（如石門株）或疫苗株（如 C 株），在易感細(xì)胞（如豬腎細(xì)胞 PK-15、豬睪丸細(xì)胞 ST 等）中培養(yǎng)增殖，通過滅活（甲醛或 β- 丙內(nèi)酯）或純化處理獲得抗原。
抗原純化：采用蔗糖密度梯度離心、親和層析等方法純化病毒粒子，確�？乖兌�，減少非特異性反應(yīng)。

（二）動(dòng)物免疫

免疫動(dòng)物：通常選擇 6-8 周齡 Balb/c 小鼠，通過腹腔注射 CSFV 抗原（輔以弗氏完全佐劑 / 不完全佐劑），免疫周期約 4-6 周，末次免疫后 3-5 天取脾臟制備脾細(xì)胞。

（三）雜交瘤細(xì)胞制備

細(xì)胞融合：將脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞（如 SP2/0、NS0）按比例（通常 3:1-10:1）混合，使用聚乙二醇（PEG）或電融合法誘導(dǎo)融合。
篩選與克隆：融合細(xì)胞接種于 HAT 培養(yǎng)基（含次黃嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶）篩選，通過間接 ELISA 法篩選能分泌抗 CSFV 抗體的雜交瘤細(xì)胞，再經(jīng)有限稀釋法克隆化，獲得單克隆細(xì)胞株。

（四）抗體生產(chǎn)與純化

體內(nèi)誘生法：將雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠腹腔，收集腹水，通過辛酸 - 硫酸銨沉淀、Protein A/G 親和層析等方法純化抗體。
體外培養(yǎng)法：在無血清培養(yǎng)基中大規(guī)模培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞，離心收集上清液，經(jīng)純化獲得抗體。

三、關(guān)鍵特性參數(shù)
（一）免疫學(xué)特性

特異性：能特異性識(shí)別 CSFV 的結(jié)構(gòu)蛋白（如 E2 糖蛋白，主要抗原表位所在區(qū)域），與其他豬病毒（如豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬圓環(huán)病毒等）無交叉反應(yīng)。
親和力：親和力常數(shù)（KD）通常在 10⁻⁸-10⁻¹² M 之間，高親和力抗體可提高診斷靈敏度。
中和活性：部分單克隆抗體具有中和病毒感染的能力，可用于中和試驗(yàn)（VNT），評(píng)估抗體對(duì) CSFV 的抑制效果。

（二）分子生物學(xué)特性

抗體類型：小鼠源單克隆抗體多為 IgG1、IgG2a 等亞型，輕鏈為 κ 或 λ 型，可通過亞型鑒定試劑盒確定。
分子量：完整抗體分子約 150 kDa（重鏈 50 kDa + 輕鏈 25 kDa×2），若為單鏈抗體（scFv）則分子量約 25-30 kDa。

（三）應(yīng)用相關(guān)參數(shù)

效價(jià)：腹水抗體效價(jià)通�？蛇_(dá) 1×10⁵-1×10⁶（ELISA 法測(cè)定），細(xì)胞培養(yǎng)上清效價(jià)約 1×10³-1×10⁴。
靈敏度與檢測(cè)限：在 ELISA 檢測(cè)中，對(duì) CSFV 的最低檢測(cè)限可達(dá) ng/mL 級(jí)，具體取決于抗體與抗原的結(jié)合效率及檢測(cè)方法優(yōu)化。
穩(wěn)定性：純化抗體在 4℃可保存數(shù)月，-20℃凍存可穩(wěn)定數(shù)年，避免反復(fù)凍融。

四、主要應(yīng)用場(chǎng)景

診斷檢測(cè)：
- 用于 ELISA、免疫熒光（IFA）、膠體金試紙條等方法，檢測(cè)豬血清、組織液中的 CSFV 抗原或抗體。
- 作為標(biāo)準(zhǔn)品或質(zhì)控品，校準(zhǔn)診斷試劑盒的準(zhǔn)確性。
病毒研究：
- 標(biāo)記 CSFV 蛋白，研究病毒入侵、復(fù)制及組裝機(jī)制。
- 篩選病毒中和表位，輔助疫苗設(shè)計(jì)（如亞單位疫苗開發(fā)）。
生物制品開發(fā)：
- 制備雙抗體夾心 ELISA 試劑盒，提高豬瘟檢測(cè)的特異性和靈敏度。
- 與抗病毒藥物聯(lián)用，探索抗體 - 藥物偶聯(lián)物（ADC）在豬瘟治療中的潛力（實(shí)驗(yàn)階段）。

五、制備難點(diǎn)與優(yōu)化方向

難點(diǎn)：CSFV 抗原表位易變異，可能導(dǎo)致單克隆抗體對(duì)不同毒株的識(shí)別能力差異；部分高親和力抗體可能因表位遮擋，中和活性有限。
優(yōu)化方向：
- 采用多株單克隆抗體混合（雞尾酒療法），覆蓋病毒不同抗原表位，提高廣譜性。
- 通過基因工程技術(shù)（如抗體人源化、噬菌體展示技術(shù)）改造小鼠抗體，降低免疫原性，提升臨床應(yīng)用潛力（如被動(dòng)免疫治療）。

六、典型案例參考

抗 CSFV E2 蛋白單克隆抗體：針對(duì) E2 糖蛋白的單克隆抗體（如 3H4、2G10 等株）是目前豬瘟診斷的常用工具，可識(shí)別 E2 蛋白上的線性或構(gòu)象表位，在病毒中和及抗原檢測(cè)中表現(xiàn)出高特異性。
中和性單克隆抗體篩選：通過病毒中和試驗(yàn)篩選出的 mAb，可用于評(píng)估 CSFV 毒株的致病性，或作為中和活性標(biāo)準(zhǔn)品用于疫苗效力評(píng)價(jià)。

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