抗豬鏈球菌（ SS）單克隆抗體的來源、制備與應(yīng)用

一、豬鏈球菌（SS）毒株型號與抗原靶點
豬鏈球菌血清型眾多（已知 35 個血清型，以 1、2、7、9 型為主），其中2 型（SS2） 是最常見的致病型，也是單克隆抗體研發(fā)的主要目標(biāo)。常見毒株型號及抗原靶點如下：
1. 經(jīng)典毒株與流行株
參考毒株：SS2 型的 P1/7（國際標(biāo)準(zhǔn)株）、05ZYH33（中國高致病性分離株）、98HAH12（臺灣分離株）。
臨床流行株：根據(jù)地域不同，如中國近年流行的 ST7 型、ST28 型 SS2 株，歐洲流行的 ST1 型 SS2 株，mAb 需針對其特異性抗原。
2. 抗原靶點
莢膜多糖（CPS）：血清型分型的關(guān)鍵抗原，mAb 可特異性識別不同血清型的莢膜結(jié)構(gòu)（如 SS2 型 CPS），用于分型診斷。
表面蛋白：
MRP（毒力相關(guān)膜蛋白）：SS2 型的主要毒力因子，mAb 可靶向其保守區(qū)域，用于中和毒力或檢測。
EF（延伸因子）：高度保守的表面蛋白，mAb 可用于廣譜檢測不同血清型。
Sao 蛋白（鏈球菌表面蛋白 A）：部分毒株（如 SS2）表達(dá)的黏附蛋白，可作為 mAb 的特異性靶點（注：用戶提到的 “SAO” 可能指此蛋白）。

二、抗體相關(guān)參數(shù)
1. 抗體亞型與純度
亞型：以小鼠來源 mAb 為例，常見亞型為 IgG1（如針對 CPS 的 mAb）、IgG2a（如針對 MRP 的 mAb），少數(shù)為 IgM（初免反應(yīng)）。
純度：通過 Protein A/G 親和層析純化后，純度≥95%，適用于免疫檢測或中和實驗。
2. 效價與特異性
效價：
細(xì)胞培養(yǎng)上清液效價：ELISA 法測定通常為 1:128～1:512。
小鼠腹水效價：可達(dá) 1:10⁴～1:10⁵（如針對 SS2 型 MRP 的 mAb 腹水效價可＞1:5×10⁴）。
特異性：
血清型特異性：抗 SS2 型 CPS 的 mAb 僅識別 SS2 型，與其他血清型（如 SS1、SS9）無交叉反應(yīng)。
種屬特異性：與其他豬病原微生物（如豬肺炎支原體、大腸桿菌等）無交叉反應(yīng)，需通過交叉 ELISA 或免疫熒光驗證。

三、制備方法與特異性保障
1. 制備流程（以 SS2 型 Sao 蛋白 mAb 為例）
抗原制備：
表達(dá)純化 Sao 蛋白（重組蛋白或天然蛋白），或使用滅活的 SS2 型全菌作為抗原（需確認(rèn) Sao 蛋白的表達(dá)活性）。
動物免疫：
免疫 6～8 周齡 BALB/c 小鼠，腹腔注射抗原（佐劑為弗氏完全 / 不完全佐劑），間隔 2 周免疫 3 次，末次免疫后 3 天取脾細(xì)胞。
細(xì)胞融合與篩選：
脾細(xì)胞與 SP2/0 骨髓瘤細(xì)胞按 4:1 比例融合，HAT 培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞。
通過間接 ELISA 篩選陽性克�。阂� Sao 蛋白包被板，檢測細(xì)胞上清液的結(jié)合活性；進(jìn)一步通過免疫熒光（IFA） 檢測 mAb 與 SS2 感染細(xì)胞的結(jié)合，或western blot（WB） 驗證對 Sao 蛋白的特異性識別。
克隆化與生產(chǎn)：
有限稀釋法克隆化雜交瘤細(xì)胞，直至單克隆穩(wěn)定（3 次克隆化）。
腹水制備（腹腔注射 Pristane 預(yù)處理的小鼠）或無血清培養(yǎng)，純化后經(jīng) 0.22μm 濾膜除菌，-20℃保存。
2. 特異性保障措施
抗原純化：使用重組 Sao 蛋白作為抗原，避免全菌抗原中的其他蛋白干擾，確保 mAb 靶向 Sao 蛋白。
多輪篩選：
通過競爭 ELISA驗證 mAb 與 Sao 蛋白的結(jié)合特異性（如加入過量 Sao 蛋白抑制結(jié)合）。
通過交叉反應(yīng)實驗：用 SS1、SS9 型全菌或其他豬病原微生物（如豬鏈球菌其他血清型、金黃色葡萄球菌等）與 mAb 孵育，確認(rèn)無交叉反應(yīng)。

四、應(yīng)用領(lǐng)域與典型場景
病原檢測與分型：
ELISA 試劑盒：抗 SS2 型 CPS 的 mAb 用于血清型鑒定，抗 Sao 蛋白 mAb 用于臨床樣本（如腦脊液、組織勻漿）中 SS2 的定量檢測。
免疫熒光（IFA）：標(biāo)記 FITC 或 TRITC 的 mAb，直接檢測組織切片或培養(yǎng)細(xì)胞中的 SS2 菌體，輔助病理診斷。
膠體金試紙條：基于抗 Sao 蛋白 mAb 的免疫層析技術(shù)，快速檢測豬鼻腔分泌物、血液中的 SS2。
毒力機(jī)制與治療研究：
抗 MRP 或 Sao 蛋白的 mAb 可中和細(xì)菌黏附宿主細(xì)胞的能力，用于體外毒力抑制實驗，或作為被動免疫制劑的候選（如仔豬被動免疫）。
疫苗研發(fā)與效力評價：
mAb 可用于評估疫苗誘導(dǎo)的抗體應(yīng)答（如檢測免疫豬血清中針對 CPS 或 Sao 蛋白的抗體水平），或作為陽性對照驗證疫苗抗原表位。

五、商業(yè)化產(chǎn)品與研究實例
美國 ATCC 相關(guān)抗體：抗 SS2 型 P1/7 株的 mAb（如克隆號 1G5），靶向 CPS，用于血清學(xué)分型。
國內(nèi)研究實例：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院研發(fā)的抗 SS2 型 05ZYH33 株 Sao 蛋白 mAb（如克隆號 3C6），可特異性識別 ST7 型流行株，中和活性 IC₅₀=10 μg/mL（體外抑菌實驗）。

六、注意事項
血清型差異：豬鏈球菌不同血清型的抗原性差異顯著，mAb 需針對目標(biāo)血清型（如 SS2），廣譜 mAb 通常靶向保守蛋白（如 EF、P60）。
應(yīng)用場景適配：
診斷用 mAb：優(yōu)先選擇針對保守抗原（如 EF、P60）的廣譜 mAb，或針對特定血清型 CPS 的分型 mAb。
中和用 mAb：需篩選針對毒力因子（如 MRP、Sao）且具有高中和活性的 mAb。
保存與使用：mAb 避免反復(fù)凍融，長期保存需在 - 80℃，工作液可加入 0.1% BSA 防止蛋白降解。