疾控中心寄生蟲病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)方案介紹

《小蟲子，哪里跑！》——疾控中心寄生蟲病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)方案介紹
2024年4月，為了落實(shí)《“健康中國2030”規(guī)劃綱要》提出的“全國所有流行縣基本控制包蟲病等重點(diǎn)寄生蟲病流行”防治目標(biāo)，全面推進(jìn)重點(diǎn)寄生蟲病的控制與消除進(jìn)程，減少寄生蟲病危害，保障群眾健康，國家疾控局等15個(gè)部門制定了《全國包蟲病等重點(diǎn)寄生蟲病綜合防治實(shí)施方案（2024—2030年）》并印發(fā)給各相關(guān)政府單位。
在疾病預(yù)防控制體系中，疾控中心寄生蟲病實(shí)驗(yàn)室占據(jù)著極為重要的地位，肩負(fù)著多項(xiàng)重要職責(zé)，不僅要為制定和完善寄生蟲病相關(guān)的法律法規(guī)、政策、標(biāo)準(zhǔn)等提供堅(jiān)實(shí)的技術(shù)支撐，還要承擔(dān)全國寄生蟲病預(yù)防控制工作的業(yè)務(wù)指導(dǎo)任務(wù)，此外，還需負(fù)責(zé)寄生蟲病的應(yīng)急處置、科學(xué)研究、國際合作等諸多事務(wù)。它就像是一個(gè)精密的 “偵察站”，專注于寄生蟲病的監(jiān)測、預(yù)防與控制，為守護(hù)公眾健康筑起一道堅(jiān)固的防線。

寄生蟲病實(shí)驗(yàn)室檢測方法：
寄生蟲病的實(shí)驗(yàn)室檢查包括病原學(xué)檢查、免疫學(xué)檢查和分子生物學(xué)檢查。

病原學(xué)檢查
病原學(xué)檢查時(shí)指通過采集患者的血液、組織液、組織、糞便等標(biāo)本，用過顯微鏡等直接觀察，或在處理、染色后觀察，以發(fā)現(xiàn)寄生蟲蟲體或蟲卵作為診斷依據(jù)，有時(shí)候還需要進(jìn)行寄生蟲那個(gè)體外培養(yǎng)或動(dòng)物接種后再進(jìn)行病原學(xué)檢查。
 
1.1直接觀察法
薄血膜法 制涂片后使用姬薩姆染色或瑞氏染色等方法染色后，行顯微鏡檢查；常用于檢查血液內(nèi)的瘧原蟲、微絲蚴、錐蟲、弓形蟲、巴貝西蟲等。
厚血膜法 制厚血膜后片，干燥后用蒸餾水溶血，再干燥后染色進(jìn)行鏡檢。
組織取材檢查 收集患者的組織樣本，將高度懷疑含有寄生蟲的病例組織送至病理科進(jìn)行鑒別診斷，通常用蘇木精-伊紅染色檢查寄生蟲。本法可用于旋毛蟲、盤尾絲蟲、羅阿絲蟲及其他蟲體的檢查。
糞便0.9%氯化鈉溶液直接涂片法 制片后直接置于顯微鏡下觀察，本法主要應(yīng)用于檢測大鼠、小鼠、豚鼠等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腸道鞭毛蟲和纖毛蟲。
糞便直接涂片染色法 本法主要為碘液染色。涂薄樣品蓋片后直接在顯微鏡下觀察。此法常用于犬、猴溶組織內(nèi)阿米巴包囊等原蟲包囊的檢測，顯微鏡下發(fā)現(xiàn)包囊即為陽性。
糞便厚涂片法 使用世衛(wèi)組織推薦的改良加藤法（Kato-Katz厚涂片法）蟲卵計(jì)數(shù)進(jìn)行鏡下定量檢測。該方法適用于多蠕蟲卵的定量檢測。

蟲卵濃集法
1.2.1 重力沉淀法 利用各種蠕蟲卵和原蟲包囊比重大于水兒自然沉降的原理達(dá)到富集目的。最終取沉渣樣本進(jìn)行鏡檢。
1.2.2 醛醚沉淀法 樣品加醛醚制樣后離心分層樣本，取細(xì)渣層鏡檢（查包囊是加一滴碘液）。
1.2.3 碘醛液離心沉淀法 配置MIF液和盧戈碘液后制樣，離心分層取沉淀層進(jìn)行鏡檢。此法適用于檢查蠕蟲卵、原蟲包囊、滋養(yǎng)體。
1.3 蟲卵漂浮法（一個(gè)中類在文章頁面中單獨(dú)弄一個(gè)框，文字內(nèi)容在框里上下滑動(dòng)，不要平鋪出來）
1.3.1 飽和氯化鈉溶液漂浮法 制樣后鏡檢
1.3.2 硫酸鋅離心漂浮法 取樣制樣后離心分層，取表層液膜2~3次，置于載玻片上鏡檢。
1.3.3 蔗糖離心浮聚法 取樣過濾離心，參照飽和氯化鈉溶液漂浮法，取載玻片表面膜鏡檢。適用于檢查糞便中隱孢子蟲卵囊。
1.3.4 氯化鋅溶液漂浮法 樣品加入氯化鋅溶液混勻，離心靜置后取上層清液制片鏡檢。此法適用于犬、貓等動(dòng)物細(xì)粒棘球絳蟲的檢測。
1.4 幼蟲孵化法
毛蚴孵化法、常規(guī)沉孵法、棉析毛蚴孵化法、鉤蚴培養(yǎng)法
1.5 肛門拭子法  
2.免疫學(xué)檢查
2.1 側(cè)流免疫層析檢測（lateral flow immunochromatographic assay, LFIA） （一個(gè)中類在文章頁面中單獨(dú)弄一個(gè)框，文字內(nèi)容在框里上下滑動(dòng)，不要平鋪出來）
2.2 免疫熒光檢測 免疫熒光檢測是結(jié)合免疫學(xué)技術(shù)和熒光染色方法的檢測方法，包括間接免疫熒光技術(shù)（IFA）、時(shí)間分辨熒光免疫分析法（TRFIA）和補(bǔ)體法。檢測原理是用已標(biāo)記了熒光素的熒光抗體或抗原作為探針，與組織或細(xì)胞標(biāo)本內(nèi)相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合成的抗原-抗體復(fù)合物，可在熒光顯微鏡下進(jìn)行肉眼觀察，標(biāo)本中受激發(fā)光照射而發(fā)出的熒光還可以被定量檢測。作為一種成熟的方法，免疫熒光檢測具有可靠、快速、靈敏、適應(yīng)性好等有點(diǎn)，常用于臨床寄生蟲病的診斷、流行病學(xué)調(diào)查和治療后的復(fù)查，目前弓形蟲病等許多人體寄生蟲病均已用免疫熒光檢測進(jìn)行常規(guī)臨床診斷。
2.3 免疫磁珠酶聯(lián)免疫分析法 常作為大型全自動(dòng)免疫分析儀的檢測方法，但是需要較完善的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。
2.4 免疫傳感器技術(shù) 生物傳感器借住固定化的生物識(shí)別分子和能量轉(zhuǎn)換器，將生化信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，可達(dá)到直接檢測的目的。此種方法需要比較昂貴的儀器來輔助，目前僅適用于實(shí)驗(yàn)室檢查。
2.5 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)   
3 分子生物學(xué)檢查
目前，聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction, PCR）技術(shù)已有了長足的發(fā)展，成為分子生物學(xué)領(lǐng)域最常用的方法之一。
3.1 PCR技術(shù)
3.2 等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)
各種寄生蟲檢驗(yàn)方法方法聯(lián)合狙擊，共筑防檢寄生蟲病的健康長城，各自在寄生蟲病的診斷中發(fā)揮著重要作用。
因此，為了高效完成各項(xiàng)工作任務(wù)，疾控中心寄生蟲病實(shí)驗(yàn)室配備了多種先進(jìn)的儀器設(shè)備。其中，顯微鏡作為實(shí)驗(yàn)室的經(jīng)典設(shè)備，在寄生蟲檢測中發(fā)揮著不可替代的作用。生物顯微鏡可以幫助工作人員在高倍觀察下，清晰地看到寄生蟲的微觀形態(tài)，如蟲卵的大小、形狀、顏色以及內(nèi)部結(jié)構(gòu)等細(xì)節(jié)特征，為鑒定寄生蟲種類提供直接證據(jù)。而且，一些配備了偏光附件的生物顯微鏡，能更好地觀察具有晶體結(jié)構(gòu)的寄生蟲成分，提升檢測的準(zhǔn)確性。除了顯微鏡，實(shí)驗(yàn)室還擁有離心機(jī)、PCR 擴(kuò)增儀、核酸測序儀等一系列設(shè)備，它們相互配合，全方位保障寄生蟲病檢測與研究工作的順利開展。
MSHOT明美顯微鏡能夠在顯微鏡端提供完整的設(shè)備解決方案，能夠助力疾控寄生蟲病實(shí)驗(yàn)室高效精準(zhǔn)的開展試驗(yàn)。
正置生物顯微鏡，可以提供良好的明場觀察效果，根據(jù)不用的樣本可以匹配不同型號(hào)的顯微鏡，可選ML11 / ML31 / ML45 / ML51-N。
生物顯微鏡ML51-N：40X-1000X放大，高數(shù)值孔徑半復(fù)物鏡，成像銳利；編碼式5孔物鏡轉(zhuǎn)盤，1μm超微調(diào)焦精度，適合精細(xì)觀察；10X/23mm大視野目鏡，樣本覆蓋更廣
數(shù)智化生物顯微鏡ML45:放大40X-1000X，編碼式物鏡轉(zhuǎn)盤，亮度記憶，LED數(shù)顯屏，顯示當(dāng)前工作狀態(tài)，ECO人走燈滅，可升級(jí)相差，暗場，簡易偏光和熒光觀察
生物顯微鏡ML31:無限遠(yuǎn)光學(xué)系統(tǒng)，40x-1000X放大，平場消色差物鏡，可升級(jí)相差，暗場，簡易偏光和熒光觀察

 
體視顯微鏡MZ62/MZX100搭配斜射光透射底座方案，適合看到透明度高的寄生蟲樣品如蛔蟲、鉤蟲等。
體視熒光顯微鏡MZX100：大變倍范圍的無限遠(yuǎn)光學(xué)體視熒光顯微鏡，采用優(yōu)質(zhì)的伽利略平行雙光路設(shè)計(jì)，分辨率高色彩真實(shí)，有豐富的配件選項(xiàng)，變倍比高達(dá)1:10。
體式顯微鏡MZ62:符合人體工程學(xué)設(shè)計(jì);可相機(jī)鏡下同步觀察，無需來回切換;靈活適配不同大小樣品；標(biāo)配22mm大視場目鏡，鏡下視野平展寬廣減少眼睛疲勞;高眼點(diǎn)設(shè)計(jì)，無需摘眼鏡也可觀察;屈光度可調(diào)，保證雙目鏡下同步清晰。

正置熒光顯微鏡MF43-N / MF31 ，搭配長壽命LED光源模組，成像清晰銳利，適合進(jìn)行樣本的熒光觀察：
研究級(jí)正置熒光顯微鏡MF43-N： 研究級(jí)正置熒光顯微鏡MF43-N配備6孔落射熒光模塊和超長壽命LED熒光光源，可擴(kuò)展升級(jí)實(shí)現(xiàn)各種觀察方式，高數(shù)值孔徑半復(fù)消色差物鏡成像清晰，尤其適合免疫熒光、FISH熒光原位雜交等應(yīng)用。
正置熒光顯微鏡MF31:正置熒光顯微鏡MF31采用無限遠(yuǎn)平場消色差物鏡和大視野目鏡，可用雙目或三目觀察，搭配LED熒光激發(fā)裝置，實(shí)現(xiàn)明場和熒光顯微觀察。


 
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*本文部分內(nèi)容參考[1]蔡祺,王劍飚.寄生蟲病的實(shí)驗(yàn)室檢查方法[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2021,36(10):1001-1007+992.侵刪。