貓紅細胞單克隆抗體的基礎(chǔ)特性、制備流程及應(yīng)用場景

瀏覽次數(shù)：103　發(fā)布日期：2025-7-1　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

貓紅細胞單克隆抗體（Feline Red Blood Cell Monoclonal Antibody，fRBC-McAb）是針對貓紅細胞表面特異性抗原制備的單克隆抗體，憑借其特異性強、均一性高等特點，在貓血型鑒定、輸血安全保障、免疫性血液病診斷及相關(guān)研究中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。以下從基礎(chǔ)特性、制備流程、應(yīng)用場景等方面詳細介紹：

一、貓紅細胞與 fRBC-McAb 的基礎(chǔ)特性

貓紅細胞的抗原特征：貓紅細胞表面存在多種獨特抗原，其中AB 血型系統(tǒng)是最主要的血型系統(tǒng)（分為 A 型、B 型、AB 型），由紅細胞表面的糖蛋白抗原決定（A 型為 N - 乙酰神經(jīng)氨酸，B 型為神經(jīng)氨酸）；此外還有 Mik 血型系統(tǒng)等次要抗原。這些抗原是引發(fā)貓輸血反應(yīng)的核心因素（如 B 型貓接受 A 型血會發(fā)生嚴(yán)重溶血），也是 fRBC-McAb 的主要靶向?qū)ο蟆?/span>
fRBC-McAb 的核心特性：由單一 B 淋巴細胞克隆分泌，僅識別貓紅細胞表面特定抗原的單一表位，具有特異性極強（可精準(zhǔn)區(qū)分 A 型、B 型等不同血型抗原）、批次穩(wěn)定性高（避免多克隆抗體成分復(fù)雜、批間差異大的問題）、可標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)等優(yōu)勢，為貓紅細胞相關(guān)研究和臨床應(yīng)用提供了可靠工具。

二、fRBC-McAb 的制備流程

免疫原制備與動物免疫：
- 免疫原處理：采集健康貓的新鮮抗凝血（需明確血型，如 A 型或 B 型貓血），用生理鹽水或 PBS 反復(fù)洗滌（去除血漿、白細胞等雜質(zhì)），制備純化的貓紅細胞懸液（濃度通常為 2-5%）。
- 動物免疫：常用 Balb/c 小鼠，通過腹腔或靜脈注射進行免疫。采用 “初次免疫 + 多次加強免疫” 策略（間隔 1-2 周），最后一次加強免疫后 3-5 天取脾臟細胞，用于細胞融合。部分情況下可添加佐劑（如弗氏佐劑）增強免疫應(yīng)答，但需注意避免對紅細胞抗原的破壞。
細胞融合與雜交瘤篩選：
- 融合操作：將免疫小鼠的脾臟 B 淋巴細胞與骨髓瘤細胞（如 SP2/0）通過聚乙二醇（PEG）或電融合技術(shù)融合，形成雜交瘤細胞。
- 篩選培養(yǎng)：利用 HAT 選擇培養(yǎng)基（含次黃嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶）篩選存活的雜交瘤細胞（未融合的骨髓瘤細胞和 B 淋巴細胞因代謝缺陷無法存活）。
陽性克隆鑒定與克隆化：
- 鑒定方法：通過凝集試驗（如試管法或玻片法）檢測雜交瘤細胞上清液與不同血型貓紅細胞的反應(yīng)（如抗 A 型 fRBC-McAb 應(yīng)僅與 A 型紅細胞發(fā)生凝集）；或采用流式細胞術(shù)（標(biāo)記熒光二抗后檢測熒光信號）驗證抗體與紅細胞表面抗原的特異性結(jié)合。
- 克隆化培養(yǎng)：對陽性細胞株通過有限稀釋法或單細胞克隆技術(shù)進行多次克隆，確保獲得能穩(wěn)定分泌目標(biāo)抗體的單克隆細胞株。
抗體生產(chǎn)與純化：
- 小規(guī)模生產(chǎn)：將雜交瘤細胞腹腔注射到預(yù)處理（如注射降植烷）的 Balb/c 小鼠，收集腹水，經(jīng)離心、飽和硫酸銨鹽析或蛋白 A/G 親和層析純化，獲得高純度抗體。
- 大規(guī)模生產(chǎn)：通過生物反應(yīng)器體外培養(yǎng)雜交瘤細胞，從培養(yǎng)液中純化抗體，適用于診斷試劑盒的工業(yè)化生產(chǎn)。

三、主要應(yīng)用領(lǐng)域

貓血型鑒定與輸血安全：
- 貓 AB 血型系統(tǒng)中，B 型貓血清中天然存在高滴度抗 A 抗體，若輸入 A 型血會引發(fā)急性溶血反應(yīng)（死亡率極高）；A 型貓接受 B 型血也可能出現(xiàn)輕度反應(yīng)。fRBC-McAb（如抗 A 型、抗 B 型單克隆抗體）可通過快速凝集試驗精準(zhǔn)鑒定貓血型（如抗 A 型抗體與待檢紅細胞凝集則為 A 型），是保障貓輸血安全的核心工具。
- 應(yīng)用示例：流浪貓救助中，對需要輸血的貓用 fRBC-McAb 快速分型，確保供血貓與受血貓血型匹配（如 A 型貓接受 A 型血，B 型貓接受 B 型血）。
免疫介導(dǎo)性溶血性貧血（IMHA）的診斷：
- IMHA 是貓常見的自身免疫性疾病，患病貓體內(nèi)產(chǎn)生抗自身紅細胞的抗體，導(dǎo)致紅細胞被破壞。fRBC-McAb 可通過直接抗球蛋白試驗（DAT，即 Coomb’s 試驗）檢測紅細胞表面吸附的自身抗體：若待檢紅細胞與 fRBC-McAb 反應(yīng)出現(xiàn)凝集，提示存在自身抗體，輔助確診 IMHA。
貓血型相關(guān)研究：
- 作為特異性探針，研究貓 AB 血型抗原的分子結(jié)構(gòu)（如糖鏈修飾差異）、遺傳機制（如 AB 型的遺傳模式）及與疾病的關(guān)聯(lián)（如某些品種貓的血型分布特點）。
- 用于探索貓紅細胞抗原在免疫應(yīng)答中的作用，如 B 型貓抗 A 抗體的產(chǎn)生機制。
診斷試劑盒開發(fā)：
- 基于 fRBC-McAb 開發(fā)標(biāo)準(zhǔn)化的貓血型檢測試劑盒（如試紙條、微量板法試劑盒），操作簡便、結(jié)果快速，適合臨床一線使用（如寵物醫(yī)院、動物救助站）。
- 用于開發(fā) IMHA 診斷試劑盒，提高疾病診斷的準(zhǔn)確性和效率。

四、優(yōu)勢與注意事項

核心優(yōu)勢：
- 特異性精準(zhǔn)：可專一識別 A 型或 B 型等特定血型抗原，避免交叉反應(yīng)（如不與其他物種紅細胞反應(yīng)），確保血型鑒定結(jié)果可靠。
- 標(biāo)準(zhǔn)化程度高：批間差異小，適合大規(guī)模臨床應(yīng)用和試劑盒生產(chǎn)，克服多克隆抗體（如 B 型貓血清抗 A 抗體）供應(yīng)不穩(wěn)定、效價波動大的問題。
注意事項：
- 抗原表位匹配：不同 fRBC-McAb 可能識別同一抗原的不同表位，需根據(jù)應(yīng)用場景驗證（如血型鑒定需確�？贵w與目標(biāo)血型抗原的強反應(yīng)性）。
- 保存條件：純化后的抗體需在 - 20℃凍存，避免反復(fù)凍融；使用前需通過凝集試驗驗證活性，確保有效性。