抗豬圓環(huán)病毒3型單克隆抗體的特性、單克隆抗體制備、抗體特性及應(yīng)用

瀏覽次數(shù)：92　發(fā)布日期：2025-7-6　來(lái)源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

抗豬圓環(huán)病毒 3 型（Porcine circovirus type 3，PCV3）單克隆抗體（Monoclonal Antibody，mAb）是針對(duì) PCV3 抗原（主要為病毒衣殼蛋白）制備的特異性抗體，在 PCV3 的診斷、致病機(jī)制研究及防控中具有重要價(jià)值。以下從 PCV3 的基本特性、單克隆抗體制備、抗體特性及應(yīng)用等方面詳細(xì)介紹：

一、豬圓環(huán)病毒 3 型（PCV3）的基本特性

PCV3 是圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬的單鏈 DNA 病毒，2016 年首次在患病豬群中發(fā)現(xiàn)，與豬繁殖障礙、皮炎腎病綜合征、心肌炎等疾病相關(guān)。其核心抗原與病毒結(jié)構(gòu)如下：

病毒結(jié)構(gòu)：
- 無(wú)囊膜，正二十面體對(duì)稱，直徑約 17-20 nm；
- 基因組為單鏈環(huán)狀 DNA，全長(zhǎng)約 2.0 kb，編碼兩個(gè)主要結(jié)構(gòu)蛋白：
  - Cap 蛋白（衣殼蛋白）：由 ORF2 基因編碼，是病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白和免疫原性蛋白，負(fù)責(zé)病毒顆粒組裝，含主要抗原表位，是單克隆抗體制備的核心靶點(diǎn)；
  - Rep 蛋白（復(fù)制相關(guān)蛋白）：由 ORF1 基因編碼，參與病毒 DNA 復(fù)制，免疫原性較弱，較少作為抗體靶點(diǎn)。
抗原特性：
Cap 蛋白是 PCV3 的主要抗原，分子量約 21-23 kDa，其氨基酸序列中含多個(gè)線性或構(gòu)象型抗原表位，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體，也是單克隆抗體識(shí)別的關(guān)鍵位點(diǎn)。

二、抗 PCV3 單克隆抗體的制備流程

抗 PCV3 mAb 的制備基于雜交瘤技術(shù)，核心步驟如下：

免疫原制備：
- 常用重組 Cap 蛋白（通過(guò)原核表達(dá)系統(tǒng)如大腸桿菌、真核表達(dá)系統(tǒng)如昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)）作為免疫原，純度需達(dá) 90% 以上；
- 也可使用滅活的 PCV3 病毒顆粒（需培養(yǎng)病毒并滅活，避免生物安全風(fēng)險(xiǎn)），但重組蛋白因成分單一、特異性高更常用。
動(dòng)物免疫：
- 通常選擇 BALB/c 小鼠，采用腹腔或皮下注射方式免疫：初次免疫用弗氏完全佐劑乳化抗原，加強(qiáng)免疫用弗氏不完全佐劑，間隔 2-3 周，共免疫 3-4 次；
- 末次免疫后 3-5 天，檢測(cè)小鼠血清抗體效價(jià)（通過(guò) ELISA 或間接免疫熒光法），選擇效價(jià)高的小鼠用于細(xì)胞融合。
細(xì)胞融合與篩選：
- 取免疫小鼠的脾臟細(xì)胞（含 B 淋巴細(xì)胞）與骨髓瘤細(xì)胞（如 SP2/0），用聚乙二醇（PEG）誘導(dǎo)融合，獲得雜交瘤細(xì)胞；
- 通過(guò) HAT 選擇培養(yǎng)基（篩選雜交瘤細(xì)胞，排除未融合的脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞）培養(yǎng)后，采用間接 ELISA（包被重組 Cap 蛋白）或免疫熒光法（檢測(cè)與 PCV3 感染細(xì)胞的結(jié)合能力）篩選陽(yáng)性克隆。
克隆化與抗體純化：
- 對(duì)陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞采用有限稀釋法或單細(xì)胞克隆儀進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，確保單克隆來(lái)源；
- 克隆穩(wěn)定后，通過(guò)小鼠腹腔接種或無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)收集腹水或上清，經(jīng) Protein G/A 親和層析純化，獲得高純度 mAb。

三、抗 PCV3 單克隆抗體的關(guān)鍵特性

分子特性：
- 抗體亞型：多為 IgG1 或 IgG2a（小鼠單克隆抗體常見(jiàn)亞型），少數(shù)為 IgM；
- 分子量：IgG 型抗體分子量約 150 kDa（由兩條重鏈和兩條輕鏈組成）；
- 親和力：通過(guò) ELISA 測(cè)定的親和常數(shù)（Ka）通常在 10⁸-10¹⁰ L/mol，高親和力抗體更適合高靈敏度檢測(cè)。
抗原識(shí)別特性：
- 識(shí)別表位：多數(shù)抗 PCV3 mAb 識(shí)別 Cap 蛋白的線性表位（如 Cap 蛋白的 N 端或 C 端保守序列），少數(shù)識(shí)別構(gòu)象表位（依賴 Cap 蛋白的空間結(jié)構(gòu)）；
- 特異性：需驗(yàn)證與其他 PCV 亞型（如 PCV2、PCV4）及其他豬源病毒（如豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒）無(wú)交叉反應(yīng)，確保對(duì) PCV3 的專一性。
功能活性：
- 部分 mAb 可通過(guò)中和試驗(yàn)驗(yàn)證是否具有病毒中和活性（抑制 PCV3 對(duì)宿主細(xì)胞的感染），這類抗體可用于病毒致病機(jī)制研究或被動(dòng)免疫防控。

四、抗 PCV3 單克隆抗體的應(yīng)用

臨床診斷試劑開(kāi)發(fā)：
- ELISA 檢測(cè)試劑盒：將 mAb 包被于酶標(biāo)板，用于檢測(cè)豬血清、組織或分泌物中的 PCV3 抗原，靈敏度可達(dá) ng 級(jí)；
- 膠體金試紙條：利用雙抗體夾心法（捕獲抗體與檢測(cè)抗體均為抗 PCV3 mAb），實(shí)現(xiàn) PCV3 的快速定性檢測(cè)，適用于基層獸醫(yī)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)；
- 免疫組化（IHC）：通過(guò) mAb 定位 PCV3 在感染豬組織（如淋巴結(jié)、腎臟）中的分布，輔助病理診斷。
病毒學(xué)研究：
- 用于PCV3 的分離與鑒定（如免疫熒光法檢測(cè)病毒在細(xì)胞中的增殖）；
- 研究病毒入侵機(jī)制（通過(guò)抗體阻斷試驗(yàn)分析 Cap 蛋白與宿主細(xì)胞受體的相互作用）；
- 分析 PCV3 的變異情況（通過(guò)抗體識(shí)別能力變化監(jiān)測(cè)抗原表位變異）。
防控應(yīng)用潛力：
- 高中和活性的 mAb 可用于被動(dòng)免疫（如給新生仔豬注射，短期預(yù)防 PCV3 感染）；
- 作為 “抗獨(dú)特型抗體” 的免疫原，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗 PCV3 的保護(hù)性抗體（潛在疫苗研發(fā)方向）。

抗 PCV3 單克隆抗體的制備以病毒 Cap 蛋白為核心靶點(diǎn)，通過(guò)雜交瘤技術(shù)獲得特異性強(qiáng)、均一性高的抗體。其分子特性（如亞型、親和力、表位識(shí)別）決定了在診斷（如 ELISA、試紙條）、研究（如病毒定位、機(jī)制分析）及防控中的應(yīng)用價(jià)值。隨著 PCV3 在養(yǎng)豬業(yè)中的危害日益凸顯，高特異性單克隆抗體將成為其精準(zhǔn)檢測(cè)和科學(xué)防控的關(guān)鍵工具。

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