PacBio推出采用HiFi技術(shù)的桌面型長(zhǎng)讀長(zhǎng)測(cè)序儀Vega

隨著科學(xué)家們對(duì)復(fù)雜生物學(xué)問(wèn)題的不斷探索，對(duì)于基因密碼的解碼也需要使用更多強(qiáng)大的組學(xué)測(cè)序工具來(lái)進(jìn)行更深入的研究。PacBio HiFi測(cè)序技術(shù)通過(guò)高精度長(zhǎng)讀長(zhǎng)解決了二代短讀長(zhǎng)無(wú)法突破的重復(fù)區(qū)域和大型結(jié)構(gòu)變異的檢測(cè)以及復(fù)雜區(qū)域的組裝，還可同步進(jìn)行表觀遺傳分析，顯著推動(dòng)了基因組學(xué)在精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)、功能基因組學(xué)和進(jìn)化生物學(xué)等領(lǐng)域的突破性進(jìn)展，是解析生命復(fù)雜性的重要基石。

                              

 
HiFi 測(cè)序性能優(yōu)勢(shì)

01.長(zhǎng)讀長(zhǎng)
Long reads

HiFi測(cè)序提供15,000-20,000個(gè)堿基對(duì)或更長(zhǎng)的讀長(zhǎng)，使研究者能夠更容易地組裝完整的基因組和測(cè)序全長(zhǎng)RNA轉(zhuǎn)錄本。

02.單分子分辨率的高準(zhǔn)確性
Single-molecule resolution high accuracy

由于PacBio的非系統(tǒng)誤差特性，HiFi測(cè)序的單分子準(zhǔn)確率可達(dá)99.9%（Q30）。
 
03.均一的基因組覆蓋率
Uniform genome coverage   

通過(guò)消除PCR擴(kuò)增偏好性，HiFi測(cè)序使研究者能夠分析其他技術(shù)通常難以獲取的基因組區(qū)域（如難以測(cè)序的GC富集區(qū)域、高度重復(fù)區(qū)域、長(zhǎng)同源聚合物和回文序列）。

04.表觀遺傳同步檢測(cè)
Simultaneous epigenetic detection

可以直接通過(guò)酶動(dòng)力學(xué)分析在測(cè)序過(guò)程中同時(shí)檢測(cè)DNA堿基修飾來(lái)提供表觀基因組數(shù)據(jù)而不需要任何額外的復(fù)雜樣品制備步驟，支持CpG的5mC檢測(cè)和Fiber-seq應(yīng)用的6mA檢測(cè)。

 
HiFi 測(cè)序技術(shù)原理流程

                            

 
HiFi 測(cè)序是由 PacBio公司開發(fā)的一種單分子、長(zhǎng)讀長(zhǎng)度的測(cè)序技術(shù)，HiFi 測(cè)序開始時(shí)，懸浮在溶液中的樣品DNA文庫(kù)片段涌入被稱為SMRT（Single Molecule Real-Time，單分子實(shí)時(shí)）芯片的納米微流控芯片表面。這種芯片的表面上覆蓋著幾百萬(wàn)個(gè)納米級(jí)直徑的小孔，稱為ZMW（Zero-Mode Waveguide，零模波導(dǎo)孔），樣品流過(guò)SMRT測(cè)序芯片時(shí)，DNA文庫(kù)被固定在ZMW孔的底部，之后加入游離核苷酸，附著在樣品DNA上的DNA聚合酶開始復(fù)制DNA分子，當(dāng)聚合酶將新的核苷酸堿基聚合到新復(fù)制的鏈中時(shí)，會(huì)釋放出微小的光，被光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)捕獲。根據(jù)發(fā)射的光，測(cè)序系統(tǒng)可以確定哪種DNA堿基被合成了。

                          

 
HiFi測(cè)序中的DNA聚合酶環(huán)繞樣品DNA分子工作多次，在ZMW孔中產(chǎn)生了DNA分子的多個(gè)副本，因此PacBio長(zhǎng)讀長(zhǎng)測(cè)序系統(tǒng)可以通過(guò)交叉參照每個(gè)分子的副本來(lái)準(zhǔn)確確定樣品DNA的正確序列，從而最大程度地提高準(zhǔn)確性，這種模式稱為CCS測(cè)序（Circular Consensus Sequencing，循環(huán)一致性）模式，最終產(chǎn)生高質(zhì)量的HiFi reads。
 

HiFi 測(cè)序應(yīng)用
 
 

 
Vega桌面式測(cè)序儀

 
近日推出的PacBio首款桌面式長(zhǎng)讀長(zhǎng)測(cè)序平臺(tái)Vega 采用 HiFi 技術(shù)，提供出色的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性和快速的運(yùn)行時(shí)間，將 PacBio的高通量長(zhǎng)讀長(zhǎng)測(cè)序儀Revio系統(tǒng)的創(chuàng)新技術(shù)，以臺(tái)式解決方案重新呈現(xiàn)，與HiFi文庫(kù)制備流程和SMRT Link運(yùn)行管理軟件無(wú)縫集成，每次運(yùn)行均可在儀器上進(jìn)行初級(jí)分析，包括DeepConsensus、甲基化檢測(cè)和barcode拆分。
 

兩種試劑耗材，輕松使用

                  

 
Vega SMRT Cell 是 HiFi測(cè)序的核心，由半導(dǎo)體元件驅(qū)動(dòng)，能夠提供單分子實(shí)時(shí)測(cè)序。Vega測(cè)序板承載上機(jī)所需樣品和試劑。一鍵式運(yùn)行設(shè)置將Vega測(cè)序板與SMRT Link運(yùn)行設(shè)計(jì)連接起來(lái)，直觀的設(shè)計(jì)和觸覺確認(rèn)降低了錯(cuò)誤率并簡(jiǎn)化了獲取結(jié)果所需的步驟。

 
Vega應(yīng)用樣本通量 
 

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