芥末源性成分PCR試劑盒

特別提示：包括芥末源性成分PCR試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：芥末源性成分PCR試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：BTN13-149
產(chǎn)品規(guī)格：50次



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名稱：鴨源性成分單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)：SYA292
規(guī)格：48次/盒
一、簡(jiǎn)介
本試劑盒用一對(duì)鴨源性成分特異性引物，結(jié)合一條特異性熒光探針，用熒光PCR技術(shù)對(duì)鴨源性成分DNA進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)。本試劑盒中鴨源性成分的探針報(bào)告基團(tuán)為FAM。

二、用途
該試劑盒適合于各種飼料及其它樣品中鴨源性成分的檢測(cè)。

三、試劑盒組成(48T)
組成成分 數(shù)量 規(guī)格
鴨物種熒光qPCR反應(yīng)液(Duck-qPCR MIX) 1管 720μL/管
陰性對(duì)照(NTC) 1管 50μL/管
陽(yáng)性對(duì)照(Duck-PTC) 1管 50μL/管

四、儲(chǔ)存條件及有效期
本試劑盒于-20℃以下保存，有效期為6個(gè)月。

五、熒光PCR儀器適用范圍：
ABI系列，Bio-Rad系列，Roche系列等熒光定量PCR檢測(cè)儀等。

六、樣品采集與DNA提取
6.1 樣品采集
樣品的采集按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《飼料中牛羊源性成分的定性檢測(cè)定性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法》(GB/T 20190-2006)要求進(jìn)行。
6.2 DNA提取
可采購(gòu)北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過(guò)柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。
 注：陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無(wú)需提取)，直接取5µL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽(yáng)性對(duì)照濃度較高，建議最后在樣品制備區(qū)域加入陽(yáng)性對(duì)照。

七、檢測(cè)步驟：
7.1 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(Duck-qPCR MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 15µL N×15µL
向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品/陰性對(duì)照(NTC)/陽(yáng)性對(duì)照(Duck-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM，淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

八、結(jié)果分析
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測(cè)結(jié)果�；�線和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過(guò)正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的最高點(diǎn)為準(zhǔn)。
8.2 試驗(yàn)成立判定
（1） 陰性對(duì)照(NTC)：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
（2） 陽(yáng)性對(duì)照(Duck-PTC)：均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線。
（3） 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則，此次試驗(yàn)視為無(wú)效。
8.3 結(jié)果判定
（1） 在試驗(yàn)成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽(yáng)性，表明鴨源性成分核酸陽(yáng)性。
（2） Ct值顯示為無(wú)的樣本為陰性樣本，表明鴨源性成分核酸陰性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判為可疑樣品。對(duì)于可疑樣品，先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，則為可疑陽(yáng)性，否則判為陰性。
（4） 對(duì)于可疑陽(yáng)性樣品，重新抽提核酸，再次進(jìn)行鴨源性成分qPCR檢測(cè)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽(yáng)性，表明鴨源性成分核酸陽(yáng)性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項(xiàng)：
（1） 初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。并嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)步驟操作。
（2） 所有使用的離心管應(yīng)高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
（3） PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等)，防止實(shí)驗(yàn)室污染。
（4） 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行，以免污染。
（5） 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。


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