鴿副粘病毒

特別提示：包括鴿副粘病毒(PPMV)熒光定量RT-PCR試劑盒(探針法)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：鴿副粘病毒(PPMV)熒光定量RT-PCR試劑盒(探針法)
英文名稱：Pigeon Paramyxovirus RT-qPCR Kit(Probe Method)
產(chǎn)品貨號(hào)：BTN15-79100
產(chǎn)品規(guī)格：50次



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名稱：人細(xì)小病毒B19核酸檢測試劑盒
貨號(hào)：SYA774
規(guī)格：48次/盒
人類細(xì)小病毒B19是英國科學(xué)家Cossart及其同事于1977年在篩查無癥狀乙肝患者血清時(shí)無意發(fā)現(xiàn)的，根據(jù)生化及分子生物學(xué)特點(diǎn)將其歸為細(xì)小病毒科。由于其是在B組的第19號(hào)樣品中發(fā)現(xiàn)的，故命名為B19病毒。最初人們認(rèn)為B19是人群中普遍存在而不致病的一種病毒，但后來發(fā)現(xiàn)，B19感染是引起傳染性紅斑、慢性溶血性貧血患者發(fā)生再障危象、免疫抑制患者慢性貧血、孕期流產(chǎn)、死胎的病原體。
本試劑盒適用于檢測人全血等標(biāo)本中的人細(xì)小病毒(B19)DNA，適用于人細(xì)小病毒(B19)感染的輔助診斷，其檢測結(jié)果僅供參考。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒用一對(duì)人細(xì)小病毒B19特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對(duì)人細(xì)小病毒B19核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。
【試劑組成】
名稱 數(shù)量 規(guī)格
核酸提取液 2管 1.5ml
酶液 1管 50μl
B19反應(yīng)液 1管 1.0ml
B19陽性質(zhì)控品 1管 50μl
陰性質(zhì)控品 1管 250μl
說明：不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
-20℃避光保存、運(yùn)輸、避免反復(fù)凍融，有效期12個(gè)月。
【適用儀器】
ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他熒光定量PCR檢測儀。
【標(biāo)本采集】
1. 適用標(biāo)本類型：人全血；
2. 標(biāo)本采集：
血液:無菌注射器抽取外周血1-2ml注入EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管；
【保存和運(yùn)輸】
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過6個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用0℃冰壺。
【使用方法】
1. 樣品處理(樣本處理區(qū))
1.1 樣本前處理
取抗凝血下層(細(xì)胞層)50μl，加入200μl ddH2O使其脹破。
1.2 DNA提取
1) 取上述處理好的標(biāo)本40μl，加入等體積核酸提取液，100℃恒溫處理10分鐘，13000 rpm離心5分鐘，取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5ml EP管，-20℃保存；
2) DNA的提取也可以采用北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(離心柱提取法)，請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。
2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1
管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 B19 反應(yīng)液 酶液
用量 20μl 1μl
3. 加樣(樣本處理區(qū))
將步驟1提取的DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μl，加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4. PCR擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))
4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi)；
4.2 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時(shí)間 收集熒光信號(hào)
1 1 cycle 94℃ 2min 否
2 40 cycle 94℃ 15sec 否
55℃ 30sec 是
反應(yīng)體系為25ul；熒光通道檢測選擇：FAM通道。
5. 結(jié)果分析判定
5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
1) 設(shè)置基線(baseline)：一般情況下，對(duì)ABI 7500、7700等儀器設(shè)為6-15cycle，對(duì)PE5700設(shè)為3-15cycle,對(duì)MJ Research Option2設(shè)為6-12cycle。特殊情況可對(duì)基線適當(dāng)調(diào)整。
2) 設(shè)置閾值(threshold):以閾值線剛超過陰性對(duì)照擴(kuò)增曲線(無規(guī)則的噪音線)的最高點(diǎn)。
5.2 結(jié)果判斷
1) 陽性：檢測樣本Ct值小于等于35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長期；
2) 可疑：檢測樣本Ct值大于35.0且小于40.0，重復(fù)一次實(shí)驗(yàn)，如果Ct值仍小于40.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長期，為陽性，否則為陰性；
3) 陰性：檢測不到樣本Ct值或Ct值為40。
6. 對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的解析
實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染，試劑污染，標(biāo)本交叉污染會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果；試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果。
7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
1) 陰性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線無對(duì)數(shù)生長期或無Ct值顯示；
2) 陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯對(duì)數(shù)生長期，且Ct值≤32;
以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無效。
【注意事項(xiàng)】
1. 所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行；
2. 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，混勻并短暫離心；
3. 反應(yīng)液應(yīng)避光保存；
4. 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；
5. 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；
6. 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染；
7. 實(shí)驗(yàn)完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器；
8. 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。