SmiMI內(nèi)切酶

特別提示：包括SmiMI內(nèi)切酶在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：SmiMI內(nèi)切酶
英文名稱：SmiMI
產(chǎn)品貨號：GS2202
產(chǎn)品規(guī)格：100U

儲存條件：冷凍（-20℃）

技術(shù)規(guī)格
 

Unit definition	One unit of the enzyme is the amount required to hydrolyze 1μgof Lambda DNA in 1hourat 37℃ in a total reaction volume of 50μl.
Recognition sites	CAYNN↑NNRTG
來源	Sphingobacterium mizutae M
Assayed on	Lambda DNA
Optimal buffer	W?(10mMTris-HCl(pH 8.5 at 25℃);10mMMgCl2;100 mM NaCl;1 mM DTT.)
Optimal temperature	37℃
Storage conditions	10mMTris-HCl(pH 7.5);250 mM NaCl;0.1 mM EDTA;7 mM 2-mercaptoethanol;200 μg/ml BSA;and 50%glycerol.Store at -20℃.
Ligations	After 5-fold overdigestion with enzyme 90%of the DNA fragments can be ligated and recut.
Non-specific hydrolisis	No nonspecific activity was detected after incubation of 1μgof Lambda DNA with 20 u.a.of enzyme for 16hoursat 37℃.
Methlation effect	Methylation sensitivity not tested
Thermal inactivation	enzyme is inactivated by incubation at 65℃ for 20 mins.
Campatible Ends	MslI,RseI^

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名稱：Tth DNA聚合酶
貨號：BTN90501
規(guī)格：250U
本酶來源于嗜熱菌Thermus thermophilus HB8。在有Mg2+等二價陽離子存在的情況下，具有DNA多聚酶活性。它與Taq酶一樣被廣泛用于PCR反應(yīng)，但耐熱性比Taq酶高，因此對高GC含量模板的PCR 也有較好的效果。本酶基本上沒有3′→5′外切酶活性及5′→3′外切酶活性，所以也可用于雙脫氧法測序。另外，本酶具有RTase活性，在Mn2+存在的情況下，RTase活性會得到強(qiáng)化。利用該特性，可以用來在同一管中進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和PCR反應(yīng)，即一步法RT PCR。(但是，在Mn2+存在時，RT-PCR的準(zhǔn)確性不高)此外，本酶與Taq DNA多聚酶一樣，PCR產(chǎn)物可通過T載體進(jìn)行TA克隆。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1．RT-PCR反應(yīng)的特異性增加：在較高的溫度下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，增加了引物雜交和延伸的特異性。
2．二級結(jié)構(gòu)減少：在較高的溫度下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，減少了由于RNA二級結(jié)構(gòu)引起的問題。

產(chǎn)品組成：

成分	規(guī)格
Tth DNA聚合酶(5U/μL)	50μl
10×Tth Buffer	1ml
說明書	1份

儲存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
以λDNA為模板，以10×Tth Buffer(+MgCl2)作為緩沖液進(jìn)行體積為50μL的PCR擴(kuò)增反應(yīng)為例

1．按下列組份配制PCR反應(yīng)液。

成分	終濃度	用量
Tth DNA聚合酶(5U/μL)	1.25U	0.25μl
10×Tth Buffer(+MgCl2)	1×	5μl
dNTP Mixture(各2.5mM)	各0.2mM	4μl
模板DNA	50pg～1μg	詳見下表
引物1(10μM)	0.1～1μM	最多到1μL
引物2(10μM)	0.1～1μM	最多到1μL
滅菌蒸餾水		加到50μL

推薦50μL PCR反應(yīng)體系中模板DNA推薦使用量：

哺乳動物基因組DNA	0.5～1μg
酵母基因組DNA	5～500ng
細(xì)菌基因組DNA	0.5～50ng
質(zhì)粒DNA	5～500pg
PCR回收片段	1～100pg

2．PCR反應(yīng)條件
以λDNA為模板，擴(kuò)增1kbp的DNA片段的PCR反應(yīng)條件如下：

注：PCR反應(yīng)條件視模板、引物等的結(jié)構(gòu)條件不同而各異。在實(shí)際操作中需根據(jù)模板、目的片段的大小、堿基序列和引物的長短等具體情況，設(shè)定最佳的反應(yīng)條件(溫度、時間等)。

注意事項(xiàng)：
1．循環(huán)測序：該酶為耐熱性酶，可通過與PCR 同樣的溫度條件進(jìn)行測序反應(yīng)。由于其高溫穩(wěn)定性好，對于復(fù)雜高級結(jié)構(gòu)的模板效果較好。
2．引物：用于耐熱性酶測序的引物需比用于非耐酶測序的引物設(shè)定更長的時間。采用較短的引物時，可能會出現(xiàn)不能獲得條帶變淡的情況。

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