RNase A溶液(2mg/mL)

特別提示：包括RNase A溶液(2mg/mL)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：RNase A溶液(2mg/mL)
英文名稱：RNase A Solution(2mg/mL)
產(chǎn)品貨號：BTN60309
產(chǎn)品規(guī)格：1.5mL

本產(chǎn)品是濃度為2mg/mL的RNase A溶液，不含DNase和蛋白酶活性，可以用于DNA提取(包括質(zhì)粒DNA提取)時和蛋白質(zhì)純化時去除RNA污染。

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

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名稱：Klenow片段(無外切酶活性)
貨號：YT510
規(guī)格：100U
本酶是沒有外切酶活性的Klenow片段，是大腸桿菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片段(Large Fragment)缺失了外切酶活性的突變體。Klenow Fragment，Exo-保留了DNA聚合酶I的5"→3"聚合酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5"→3"和3"→5"外切酶活性。

特點：由于Klenow Fragment，Exo-沒有外切酶活性，其在末端補平時經(jīng)常會在3"末端額外加上1個或多個核苷酸，因此不能用于產(chǎn)生平末端而用于后續(xù)的連接。
用途：5"突出末端的標記；隨機引物法進行DNA標記；Sanger雙脫氧法進行DNA測序等。
來源：由大腸桿菌表達，表達基因的來源為突變的 polA 基因片段。
分子量：約68kDa(單體)。
活性定義：37℃30分鐘內(nèi)，催化10nmol脫氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定義為1個活性單位。
酶活性檢測條件：67mM potassium phosphate(pH7.4)，6.7mM MgCl2，1mM 2-mercaptoethanol，0.033mM dATP，0.033mM dTTP，0.4MBq/ml[3H]-dTTP，62.5μg/ml poly(dA-dT)·poly(dA-dT)。
純度：不含DNA內(nèi)切酶，不含RNase。
酶儲存溶液：25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.1mM EDTA，1mM DTT，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：500mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃)，50mM MgCl2， 10mM DTT。
失活或抑制：75℃加熱10分鐘或加入適量EDTA均可導(dǎo)致Klenow Fragment，Exo-失活。金屬離子螯合劑，無機焦磷酸鹽(PPi)，大劑量的無機磷酸鹽(Pi)均對Klenow Fragment，Exo-有抑制作用。
儲存條件：-20℃。

使用說明：

1. 隨機引物法進行DNA標記：
a. 參考如下表格設(shè)置反應(yīng)體系：
DNA———————————————————————————————10µl(100ng)
Reaction Buffer (10X)——————————————————————5µl
125µM random decamer or hexamer primer——————————————10µl
補充無核酸酶的去離子水——————————————————————至40μl
混勻后沸水浴孵育5-10分鐘，立即置于冰浴冷卻。進行后續(xù)步驟前離心沉淀液
3 dNTP Mixture (0.25mM each , without the labeled—————————4μl
[α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol (3000Ci/mmol)————————————1.85MBq (50μCi)
Klenow Fragment，Exo-———————————————————————1µl (5U)
補充無核酸酶的去離子水———————————————————————至50µl
b. 按上表設(shè)置好反應(yīng)體系后，輕輕混勻(可以用移液器吹打混勻或用 Vortex在最低速度輕輕混勻)，隨后離心沉淀液體。
c. 對于random decamer primer，37℃孵育5分鐘；對于random hexamer primer，37℃孵育10分鐘。
d. 加入4μl 0.25mM dNTP，混勻后37℃孵育5分鐘。
e. 加入1μl 0.5M EDTA，pH8.0終止反應(yīng)。
f. 取1μl上述液體用于檢測標記的效率。
g. 用Sephadex G-50或Bio-Gel P-60或其它適當試劑盒純化標記好的探針。

2. 雙鏈DNA 5’突出(5’ overhang)末端的標記：
a. 參考如下表格設(shè)置反應(yīng)體系：
Digested DNA ——————————————————————————10~15µl(0.1~4μg)
Reaction Buffer (10X)——————————————————————2µl
[α-32P]-dNTP, ~15-30 TBq/mmol(400-800Ci/mmol) —————————0.74 MBq(20μCi)
或 [α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol(3000Ci/mmol)———————————2.96 MBq(80μCi)
3 dNTP Mixture (2.5mM each , without the labeled）————————2μl
Klenow Fragment，Exo-———————————————————————0.2μl (1U)
補充無核酸酶的去離子水———————————————————————至20µl
b. 按上述體系配好之后，輕輕混勻(可以用移液器吹打混勻或用 Vortex在最低速度輕輕混勻)，隨后離心沉淀液體。
c. 30℃孵育15分鐘。
d. 75℃孵育10分鐘終止反應(yīng)。

3. 其他用途可以參考上述用途或適當?shù)奈墨I資料進行。

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貨號	名稱	規(guī)格
SV0011	AciI限制性內(nèi)切酶	1KU|200U|100U
SV0027	AgeI限制性內(nèi)切酶	1,500U|300U|150U
SV0170	BsaXI限制性內(nèi)切酶	500U|100U
SV0365	EcoRV-HF RE-Mix限制性內(nèi)切酶	200次
SV0458	MboI限制性內(nèi)切酶	2500U|2500U|500U|250U
SV0606	PsiI限制性內(nèi)切酶	1KU|200U
SV0630	PvuII限制性內(nèi)切酶	25KU|25KU|5KU|5KU|2500U