口腔拭子基因組DNA提取試劑盒

特別提示：包括口腔拭子基因組DNA提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：口腔拭子基因組DNA提取試劑盒
英文名稱：Swab Genomic DNA Extraction Kit
產(chǎn)品貨號：WE0179
產(chǎn)品規(guī)格：50次|200次

  本試劑盒提供一種簡單快速分離純化口腔拭子樣本總DNA的方法。該試劑盒采用可特異性結(jié)合DNA的硅基質(zhì)膜和獨特的緩沖系統(tǒng)，高效專一吸附DNA，每個拭子可得到0.5-3.5μg基因組DNA，提取的DNA片段大、純度高、質(zhì)量穩(wěn)定可靠。適用于酶切、PCR、文庫構(gòu)建、Southern雜交等實驗。

試劑盒組成：

組份	50次	200次
Buffer GR	25ml	120ml
Buffer GL	25ml	120ml
Buffer GW1(濃縮液)	13ml	52ml
Buffer GW2(濃縮液)	15ml	75ml
Buffer GE	15ml	60ml
蛋白酶K	25mg	90mg
蛋白酶K 儲存液	1.25ml	5ml
吸附柱DS及收集管	50套	200套
離心管(1.5ml)	50個	200個

產(chǎn)品特點：
1、采用硅基質(zhì)膜原理，簡單、快速從口腔拭子中提取基因組DNA。
2、提取的基因組DNA片段大、純度高。
3、單個拭子樣本得率達到0.5-3.5μg。

自備試劑：無水乙醇。

實驗前準備及重要注意事項：
1、向蛋白酶K 中加入指定用量(1.25ml/5ml)的蛋白酶K 儲存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿長時間室溫放置，避免反復(fù)凍融，以免影響其活性。
2、第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標簽說明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入無水乙醇。
3、使用前若發(fā)現(xiàn)Buffer GL有沉淀，請將Buffer GL于56℃水浴溶解。
4、全部離心步驟可在室溫下進行。
5、取樣：使用口腔拭子在口腔內(nèi)壁擦拭6次，晾干2小時保存，為確保樣本不被食物或飲料污染，取樣前30分鐘內(nèi)請勿進食和飲水。

操作步驟：

1．將口腔拭子的棉簽用剪刀從桿上剪下，置于2ml的離心管(自備)中，加入400μl Buffer GR。
注意：如需無RNA污染的基因組DNA，可加入4μl濃度為100 mg/ml 的RNase A溶液(貨號：WE0225S)，震蕩混勻。
2．加入20μl 蛋白酶K 和 400μl Buffer GL，立即渦旋震蕩15秒，充分混勻。
注意：加入Buffer GL后立即充分混勻；不可將蛋白酶K 直接加入Buffer GL中使用。
3．56℃放置10分鐘，短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。
4．加入400μl無水乙醇，渦旋震蕩充分混勻，短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：加入無水乙醇后可能會產(chǎn)生白色沉淀，不會影響后續(xù)實驗。
5．將上步所得溶液和沉淀分兩次加入到已裝入收集管的吸附柱中，一次最多不超過700μl 。12000rpm(～～13400×g)離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
6．向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
7．向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心3分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需進一步提高DNA純度，可重復(fù)步驟7。
8．12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫數(shù)分鐘，以徹底晾干。
注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶促反應(yīng)(酶切、PCR等)。
9．將吸附柱置于一個新的1.5ml離心管中，向吸附柱的中間部位懸空加入50μl Buffer GE或滅菌水，室溫放置2-5分鐘，12000rpm離心1分鐘，收集DNA溶液，-20℃保存。
注意：
1)如果下游實驗對pH值或EDTA敏感，可以用滅菌水洗脫。洗脫液的pH值對洗脫效率有很大影響，若用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍)，pH值低于7.0時洗脫效率不高。
2)若需長期保存，推薦用Buffer GE洗脫并于-20℃保存。

儲存條件：室溫(15～30℃)。


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