南瓜花葉病毒(SqMV)RT-PCR試劑盒

特別提示：包括南瓜花葉病毒(SqMV)RT-PCR試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：南瓜花葉病毒(SqMV)RT-PCR試劑盒
英文名稱：Squash Mosaic Virus RT-PCR Kit
產(chǎn)品貨號：BTN13-4410
產(chǎn)品規(guī)格：50次



根據(jù)您的關(guān)注的南瓜花葉病毒(SqMV)RT-PCR試劑盒，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：



名稱：新布尼亞病毒單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒
貨號：SYA249
規(guī)格：48次/盒
一、簡介：
本試劑盒用一對新布尼亞病毒特異性引物，結(jié)合特異性熒光探針，用一步法熒光RT-PCR技術(shù)對新布尼亞病毒 RNA進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。本試劑盒中新布尼亞病毒的探針報告基團(tuán)為FAM。

二、用途：
本試劑盒適用于新布尼亞病毒感染的輔助診斷、監(jiān)測及流行病學(xué)調(diào)查，其檢測結(jié)果僅供參考。

三、試劑盒組成：(48T)
組份 數(shù)量 規(guī)格
新布尼亞熒光qRT-PCR反應(yīng)液 1管 960μL/管
酶混合物 1管 48μL/管
陰性對照 1管 250μL/管
陽性對照 1管 50μL/管

四、儲存條件及有效期：
本試劑盒于-20℃以下保存，有效期為12個月。

五、熒光PCR儀器適用范圍：
ABI系列，Roche系列等熒光定量PCR檢測儀等。

六、樣品的處理與RNA提取
6.1 樣品前處理
按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)采集。標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-80℃，但不能超過6個月，標(biāo)本運送應(yīng)采用0℃冰壺。
組織樣品：每份組織分別從3個不同的位置稱取樣品約1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取0.2g于研磨器中研磨，加入1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL 滅菌離心管中；液體樣品，直接取100μL提取。
6.2 RNA提取
可采購北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的RNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。
 注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5µL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議最后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。

七、檢測步驟：
7.1 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光qRT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR Reaction Buffer、酶混合物，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光SFTSV反應(yīng)液 20µL N×20µL
酶混合物 1µL N×1µL
總量 21µL N×21µL
計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入21μL，向每管中加入處理后樣品/陰性對照/陽性對照4μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qRT-PCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實時熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
反轉(zhuǎn)錄(Reverse Transcription) 1循環(huán) 42℃ for 20 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 94℃ for 15 sec
55℃ for 30 sec
在55℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

八、結(jié)果分析：
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測結(jié)果�；�線和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的最高點為準(zhǔn)。
8.2 試驗成立判定
（1） 陰性對照：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
（2） 陽性對照：均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線。
（3） 以上條件應(yīng)同時滿足，否則，此次試驗視為無效。
8.3 結(jié)果判定
（1） 在試驗成立的條件下，Ct值<35的樣本為陽性，表明新布尼亞病毒核酸陽性。
（2） Ct值顯示為無或Ct值≥38的樣本為陰性樣本，表明新布尼亞病毒核酸陰性。
（3） 如果35≤Ct值<38，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對數(shù)擴(kuò)增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
（4） 對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進(jìn)行新布尼亞病毒 qRT-PCR檢測。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽性，表明新布尼亞病毒核酸陽性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項：
（1） 初次使用前請仔細(xì)閱讀說明書。并嚴(yán)格按照說明書步驟操作。
（2） 所有使用的離心管最好高壓滅菌，而且必須不含RNA酶。
（3） PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等)，防止實驗室污染。
（4） 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進(jìn)行，以免污染。
（5） 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進(jìn)行處理。


關(guān)注南瓜花葉病毒(SqMV)RT-PCR試劑盒，的同時，為您推薦更多您可能感興趣的產(chǎn)品：


SYA166 甲型H1N1/甲型流感病毒雙重?zé)晒釶CR檢測試劑盒 48次/盒
BTN15-35100-2 奧葉茲基氏病病毒(ADV)熒光定量PCR試劑盒(探針法) 50次
BTN14-16100 禽副粘病毒(APMV)熒光定量RT-PCR試劑盒(染料法) 50次
BTN13-1340 大麥黃花葉病毒(BaYMV)RT-PCR試劑盒 50次
BTN13-1460 蠶豆枯萎病毒1型(BBWV I)RT-PCR試劑盒 50次
BTN13-87300 犬腺病毒(CAV)PCR試劑盒 50次
BTN14-37300 中山病毒熒光定量RT-PCR試劑盒(染料法) 50次
BTN13-20700 馬流感病毒H3N8亞型(EIV)RT-PCR試劑盒 50次