人副流感病毒4型單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒

特別提示：包括人副流感病毒4型單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：人副流感病毒4型單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：SYA177
產(chǎn)品規(guī)格：48次/盒

人副流感病毒4型單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
一、簡(jiǎn)介：
人副流感病毒(Parainfluenza viruses，PIVs)，是一種常常引起兒童下呼吸道感染的單鏈的RNA病毒，屬于副黏病毒。本試劑盒用一對(duì)人副流感病毒4 型特異性引物，結(jié)合一條特異性熒光探針，用一步法熒光RT-PCR 技術(shù)對(duì)人副流感病毒4 型RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。本試劑盒中人副流感病毒4 型(PIV4)的探針報(bào)告基團(tuán)為FAM。

二、用途：
本試劑盒適用于各種咽拭子、鼻拭子等臨床樣品中人副流感病毒4 型的特異性檢測(cè)。適用于人副流感病毒4 型感染的輔助診斷、監(jiān)測(cè)及流行病學(xué)調(diào)查，其檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考。

三、試劑盒組成：(48T)
組份 數(shù)量 規(guī)格
人副流感病毒4型反應(yīng)液(PIV4-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
無(wú)核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
陰性對(duì)照(NTC) 1管 50μL/管
人副流感病毒4 型陽(yáng)性對(duì)照(PIV4-PTC) 1管 50μL/管

四、儲(chǔ)存條件及有效期：
本試劑盒于-20℃以下保存，有效期為6個(gè)月，反復(fù)凍融次數(shù)不宜超過(guò)5次。

五、熒光PCR儀器適用范圍：
ABI系列，Stratagene MX系列，Bio-Rad系列等熒光定量PCR檢測(cè)儀等。

六、樣品的采集與RNA提取
6.1 樣品的采集
按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)采集。標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-80℃，但不能超過(guò)6個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用0℃冰壺。
6.1.1 血清：用一次性無(wú)菌注射器抽取靜脈血2mL，注入無(wú)菌的干燥玻璃管，室溫(22-25℃)放置30-60min，血標(biāo)本可自發(fā)完成凝集析出血清，或直接使用水平離心機(jī)，3000rpm離心5min，吸取上層血清，轉(zhuǎn)移至1.5mL滅菌離心管。
6.1.2 血漿：用一次性無(wú)菌注射器抽取靜脈血2mL，注入含EDTA2Na(乙二胺四乙酸二鈉)或檸檬酸鈉抗凝劑的玻璃管，立即輕輕顛倒玻璃管混合5-10次，使抗凝劑與靜脈血充分混勻，5-10min后即可分離出血漿，轉(zhuǎn)移至1.5mL滅菌離心管。
6.1.3 拭子、分泌物等樣品：在裝有拭子或分泌物的離心管中加入500μL PBS或生理鹽水，劇烈振蕩30s。棉拭子盡量擠出液體轉(zhuǎn)移到無(wú)RNA酶污染的離心管中，6000rpm離心20s，取上清備用。
6.1.4 病灶組織樣品：稱取組織約0.1g于研磨器或組織勻漿器中研磨(最好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理鹽水研磨至無(wú)塊狀物，然后將樣品轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液于1.5mL滅菌離心管中。
6.2 RNA提取
可采購(gòu)北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的RNA提取試劑盒(過(guò)柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。
 注：陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無(wú)需提取)，直接取5μL 加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽(yáng)性對(duì)照濃度較高，建議最后在樣品制備區(qū)域加入陽(yáng)性對(duì)照。

七、檢測(cè)步驟：
7.1 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光qRT-PCR 反應(yīng)液(PIV4-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm 離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1µL N×1µL
總量 15µL N×15µL
計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm 離心10s，向設(shè)定的N 個(gè)PCR 反應(yīng)管中分別加入15μL，向每管中加入處理后樣品/陰性對(duì)照(NTC)/陽(yáng)性對(duì)照PIV4-PTC)5μL，10000rpm 瞬時(shí)離心10 秒。
7.2 qRT-PCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
反轉(zhuǎn)錄(Reverse Transcription) 1循環(huán) 45℃ for 10 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。其中FAM基團(tuán)檢測(cè)PIV4，淬滅基團(tuán)為None。

八、結(jié)果分析：
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測(cè)結(jié)果。基線和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過(guò)正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的最高點(diǎn)為準(zhǔn)。
8.2 試驗(yàn)成立判定
(1) 陰性對(duì)照(NTC)：FAM和HEX/VIC/JOE通道全部陰性。
(2) 陽(yáng)性對(duì)照(PIV4-PTC)：FAM和HEX/VIC/JOE通道均有擴(kuò)增曲線。
以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則，此次試驗(yàn)視為無(wú)效
8.3 結(jié)果判定
FAM通道：Ct值≤35，人副流感病毒PIV4亞型核酸為陽(yáng)性；Ct值顯示為無(wú)的樣本為陰性樣本，表明人副流感病毒PIV4亞型核酸陰性。Ct值在35-40個(gè)循環(huán)之間，為灰區(qū)，需要進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽(yáng)性，表明人副流感病毒PIV4亞型核酸陽(yáng)性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項(xiàng)：
(1) 初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書。并嚴(yán)格按照說(shuō)明書步驟操作。
(2) 所有使用的離心管最好高壓滅菌，而且必須不含RNA 酶。
(3) PCR 操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR 擴(kuò)增區(qū)等)，防止實(shí)驗(yàn)室污染。
(4) 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行，以免污染。
(5) 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。


根據(jù)您的關(guān)注的人副流感病毒4型單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：



名稱：博卡(Boca)/呼吸道合胞(RSV)/偏肺(MPV)病毒三重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)：SYA193
規(guī)格：48次/盒

名稱：犬冠狀病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)：BTN11-180401
規(guī)格：50次
犬冠狀病毒(CCV)為單鏈RNA病毒，有6～7種多肽，其中4 種是糖肽，不含RNA聚合酶及神經(jīng)氨酸酶。可使犬發(fā)生程度不同的胃腸炎癥狀，特征有頻繁嘔吐、腹瀉、沉郁、厭食等癥狀。本病一年四季均可發(fā)生，以冬季多發(fā)，病犬是主要的傳染原，犬可通過(guò)呼吸道、消化道、糞便及污染物傳染。該病一但發(fā)生，同窩犬同室犬很難控制均可造成感染。幼犬死亡率較高,對(duì)幼犬的危害較大。最近的研究發(fā)現(xiàn),CCV 感染的宿主范圍有不斷擴(kuò)大的趨勢(shì),許多野生動(dòng)物如虎、獅、大熊貓、小熊貓、水紹也可感染。所以對(duì)犬呼吸道病毒的快速準(zhǔn)確檢測(cè)與鑒定具有重要的臨床意義。本產(chǎn)品根據(jù)RT-PCR原理開發(fā)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 使用一管式RT-PCR 試劑盒，減少了操作步驟，降低了操作誤差。
2. 靈敏度高于過(guò)去使用的ELISA 方法，能達(dá)到至少1000 拷貝/反應(yīng)。
3. 簡(jiǎn)單快速，用戶不需單獨(dú)準(zhǔn)備每種試劑。
4. 針對(duì)犬冠狀病毒M 保守區(qū)設(shè)計(jì)，檢測(cè)的特異性強(qiáng)。
5. 用于CCV的定性鑒定檢測(cè)和分子流行病學(xué)調(diào)查。

產(chǎn)品組成：

組分	編號(hào)	規(guī)格(50T)
雙酶一管式RT-PCR Buffer，2×	BTN91202A	750μl
MMLV-Taq Mix	BTN91202B	100μl
CCV專一性引物對(duì)	yw14191420	100μl
CCV 陽(yáng)性對(duì)照（10E8 拷貝/uL）	Yw14211422	50μl
超純水	BTN100935	1mL

保存條件：-20℃保存，有效期一年。

關(guān)注人副流感病毒4型單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒，的同時(shí)，為您推薦更多您可能感興趣的產(chǎn)品：


BTN11-170601 禽流感病毒H5/H7/H9亞型熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒 50次
BTN15-58700 B皰疹病毒熒光定量PCR試劑盒(探針法) 50次
BTN13-1730 櫻桃葉卷曲病毒(CLRV)RT-PCR試劑盒 50次
BTN14-46500 病毒熒光定量RT-PCR試劑盒(染料法) 50次
BTN15-42300-2 豬霍亂病毒熒光定量RT-PCR試劑盒(探針法) 50次
BTN15-54000 小鼠白血病病毒(MLV)熒光定量RT-PCR試劑盒(探針法) 50次
BTN13-15200 綿羊星狀病毒(OAstV)RT-PCR試劑盒 50次
BTN14-49000 病毒熒光定量RT-PCR試劑盒(染料法) 50次