高通量96孔板植物基因組DNA提取試劑盒

特別提示：包括高通量96孔板植物基因組DNA提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：高通量96孔板植物基因組DNA提取試劑盒
英文名稱：96wells Plant Genomic DNA Extraction Kit
產(chǎn)品貨號：WH0153
產(chǎn)品規(guī)格：2×96孔

本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的離心吸附板和獨特的緩沖液系統(tǒng)，用于提取植物細(xì)胞中的基因組DNA。離心吸附板中采用的硅基質(zhì)材料為本公司特有新型材料，高效、專一吸附DNA，可最大限度去除植物細(xì)胞中雜質(zhì)蛋白及其他有機化合物。提取的基因組DNA片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、qPCR文庫構(gòu)建、Southern雜交等實驗。

產(chǎn)品特點：
·操作便捷：90min內(nèi)即可獲得高品質(zhì)基因組DNA。
·普適性廣：特別適合于富含多糖多酚植物和植物干粉。
·產(chǎn)物純度高，質(zhì)量好：純化過的基因組DNA可直接用作PCR模板、酶切、雜交等分子生物學(xué)實驗。
·自動化：可配合大部分核酸自動純化儀。
 

組分	規(guī)格
緩沖液GP1	160ml
緩沖液GP2	160ml
緩沖液GD	52ml
漂洗液PW	50ml
洗脫緩沖液TE	60ml
半裙邊96孔吸附板CB3	2塊
96孔深孔板	6塊
封口膜	12張

儲存條件：室溫（15-25℃）干燥條件下可保存12個月；更長時間的保存可置于2-8℃。在2-8℃保存條件下，若產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)先將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫中放置一段時間，必要時可在37℃水浴中預(yù)熱10 min，以溶解沉淀。

注意事項：請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。
1．樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致提取的DNA片段較小、提取量也下降。
2．若緩沖液GP1和GP2中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，并搖勻后使用。
3．所有的離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下進行。
4．不同來源的植物組織材料中提取的DNA的量會有差異，100mg植物組織可提取3～30μg DNA。

操作步驟：
使用前請先在緩沖液GD和漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標(biāo)簽。

1．取植物新鮮組織約100mg或干重組織約30 mg，加入液氮充分研磨。
2．將研磨好的粉末迅速轉(zhuǎn)移到預(yù)先裝有700μl 65℃預(yù)熱緩沖液GP1的離心管中（實驗前在預(yù)熱的GP1中加入巰基乙醇，使其終濃度為0.1%），迅速顛倒混勻后，將離心管放在65℃水浴20 min，水浴過程中顛倒離心管以混合樣品數(shù)次。
3．加入700μl氯fǎng，充分混勻，12000rpm （~13400×g )離心5 min。
  注：若提取富含多酚或淀粉的植物組織，可在第3步前，用酚:氯fǎng/1:1進行等體積抽提。
4．小心地將上一步所得上層水相轉(zhuǎn)入一個96孔深孔板中，加入700μl緩沖液GP2，充分混勻。
5．將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個96孔吸附板CB3中（吸附板已放置在96孔深孔板上），3600rpm（~2,130×g)離心5 min，倒掉廢液，吸附板CB3重新放回96孔深孔板。
6．向96孔吸附板CB3中加入600 μl漂洗液GD（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），3600rpm（~2,130×g)離心5 min，倒掉廢液，將96孔吸附板CB3重新放回96孔深孔板。
7．向吸附板CB3中加入600 μl漂洗液PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），3600rpm（~2,130×g)離心5 min，倒掉廢液，將96孔吸附板CB3重新放回96孔深孔板。
8．向吸附板CB3中加入600 μl漂洗液PW，3600rpm（~2,130×g)離心5 min，倒掉廢液。
  注意：如果吸附板膜呈現(xiàn)綠色，向吸附板CB3中加入500 μl無水乙醇，3600rpm（~2,130×g)離心5 min，倒掉廢液，將吸附板CB3放回96孔深孔板。
9．將96孔吸附板CB3放回96孔深孔板中，3600rpm（~2,130×g)離心5 min，倒掉廢液。將96孔吸附板CB3置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
  注意：這一步的目的是將96孔吸附板中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實驗。
10．將96孔吸附板CB3轉(zhuǎn)入一個干凈的96孔深孔板中，向吸附膜的中間部位懸空滴加50-200 μl洗脫緩沖液TE，室溫放置2-5 min，3600rpm（~2,130×g)離心8 min，將溶液收集到96孔深孔板中。
  注意：洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50 μl，體積過小影響回收效率。洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用ddH2O做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。為增加基因組DNA的得率，可將收集得到的溶液再加入吸附板CB3中，室溫放置2 min，3,600 rpm （~2,130×g)離心5-8 min。

DNA濃度及純度檢測：
1．得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)�；厥盏玫降腄NA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。
2．DNA應(yīng)在OD₂₆₀處有顯著吸收峰，OD₂₆₀值為1相當(dāng)于大約50μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml單鏈DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值應(yīng)為1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用ddH2O，比值會偏低，因為pH值和離子存在會影響光吸收值，但并不表示純度低。

根據(jù)您的關(guān)注的高通量96孔板植物基因組DNA提取試劑盒，高通量96孔板植物gDNA提取試劑盒，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：


BTN130938 痰液采集器 1個
BTN130934 柱式石蠟包埋組織DNA提取試劑盒 30次
BTN60602 柱式植物DNA提取試劑盒 50次
BTN130831 絲狀真菌線粒體DNA提取試劑盒 15次
BTN60806 一步式細(xì)菌DNA提取試劑盒 50次
WE0399 游離DNA樣本保存管(10ml，PET) 5ml×5支|5ml×50支
ALH099 PCR產(chǎn)物DNA純化回收試劑盒 50次|100次|200次
RFT028 高純度質(zhì)粒提取試劑盒 100次|200次

關(guān)注高通量96孔板植物基因組DNA提取試劑盒，高通量96孔板植物gDNA提取試劑盒的同時，為您推薦更多您可能感興趣的產(chǎn)品：



名稱：一步離心式石蠟清除劑
貨號：BTN70302
規(guī)格：100次
用石蠟包埋組織作為材料進行PCR的難題之一是如何有效去除石蠟，因為殘留的石蠟不但會影響DNA提取，還會干擾PCR擴增。常規(guī)的脫蠟方法一般需要1-2小時的時間，需要多次離心，每次離心都會造成樣品的丟失。本產(chǎn)品只需要一步離心，克服了常規(guī)方法的缺點。

產(chǎn)品特點：
1.快速簡單，只需要離心一次，免去了反復(fù)換液和離心，減少了樣品的丟失。
2. 脫蠟效果好，跟經(jīng)典的二甲苯/乙醇法相當(dāng)。
3. 即開即用，客戶自己不需要準(zhǔn)備額外的試劑。

產(chǎn)品組成：

成分	規(guī)格
溶液A	100mL
溶液B	7.5ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸及保存，有效期一年。

使用方法：
1. 將1mL溶液A加入到1.5mL塑料離心管中。
2. 放入一片不超過25μm的石蠟包埋組織切片。
3.以最大速度振蕩10秒。
4. 加入75μL溶液B。
5. 振蕩10秒混合。
6. 7000 g離心2分鐘，小心吸棄上清。
7.真空抽干機抽干離心管中殘留的液體。此步驟約需要一小時。
8. 得到的石蠟包埋組織切片即可用于DNA提取。

名稱：柱式石蠟包埋組織DNA提取試劑盒
貨號：BTN130934
規(guī)格：30次

名稱：絲狀真菌線粒體DNA提取試劑盒
貨號：BTN130831
規(guī)格：15次
線粒體是重要的、負(fù)責(zé)能量產(chǎn)生的極其重要的細(xì)胞器。對絲狀真菌線粒體進行生化，遺傳和分子生物學(xué)研究都需要先進行線粒體純化。本產(chǎn)品就是基于密度梯度離心的，專門用于從絲狀真菌葉片中純化完整線粒體、再從中純化線粒體DNA的試劑盒。

試劑盒特點：
1. 即用型試劑盒，用戶不需要單獨配制各種溶液。
2. 所得線粒體可用于后續(xù)的SDS-PAGE、Western、ELSIA、蛋白組分析、線粒體DNA和線粒體RNA純化。
3. 本產(chǎn)品足夠15次線粒體純化和15次線粒體DNA提取，每次可處理10-20g菌絲體，能得到1-5mg左右線粒體。
4. 已經(jīng)成功用于Aspergillus candidus、Aspergillus nidμLans、Magnaporthe oryzae、Neurospora crassa、Penicillium chrysogenum、Rhizopus stononifer等絲狀真菌。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	250mL×2
成分B	150g
溶液C	120ml
帶柄尼龍濾膜	1個
通用線粒體DNA溶液A	10ml
通用線粒體DNA溶液B	5ml
通用線粒體DNA溶液C	15ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸和保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：純化DNA提取用的線粒體的要求比純化功能研究用的線粒體的要求要低，但整個操作還是最好在冰上或者在冷室進行，所用器皿和溶液最好在4℃預(yù)冷，離心最好要在4℃進行，離心力以g而不是rpm計算。

一：菌絲的搖瓶培養(yǎng)
1. 使用合適的絲狀真菌培養(yǎng)基，接種孢子至終濃度為2×10E6/mL。一般100mL液體培養(yǎng)基可以得到0.8-1.2g菌絲體，而本方法一次可以處理10-20g菌絲體，故最好一次培養(yǎng)1-2升。
2.在合適的溫度(如25℃、30℃或37℃，根據(jù)真菌不同而不同)250rpm/min搖晃培養(yǎng)16-20小時。
3. 用多層紗布或多層過濾紙過濾收集菌絲，用冰浴的自備去離子水洗滌菌絲三次去除殘留的培養(yǎng)基。
4. 用吸水紙吸干菌絲的水分，稱重后立即使用。如果在-80℃或液氮長期放置，線粒體回收效率將減低。

二：線粒體粗提液的制備
5. 制備溶液A工作液：每次提取需150mL溶液A工作液，制備方法是將20mL溶液A和130mL自備去離子水混合，冰上預(yù)冷即可。
6.在200mL燒杯中，加入100mL預(yù)冷的溶液A工作液，再加入新制備的菌絲體，然后全部轉(zhuǎn)移到Waring勻漿機(家用果汁勻漿機)中，低速勻漿10秒，避免起泡沫。用玻璃棒把菌絲按入勻漿機底部后，再低速勻漿10秒。注意：還可以選擇Dounce玻璃勻漿器，Polytron勻漿機和研磨(加玻璃珠)等方法，但它們單次處理量一般都較小，需多份處理再匯集。
7. 用帶柄尼龍濾膜過濾勻漿液，用預(yù)冷的200mL量筒收集穿透液。
8. 將剩下的菌絲體轉(zhuǎn)移到Waring勻漿機中，再加入40mL預(yù)冷的溶液A工作液，低速勻漿10秒，用上步的帶柄尼龍濾膜過濾，用預(yù)冷的200mL量筒收集穿透液。注意：帶柄尼龍濾膜后可反復(fù)使用。
9. 將穿透液分到4個預(yù)冷的50mL的塑料離心管中(每個約35mL)。
10.在水平轉(zhuǎn)子離心機上4℃ 4000g離心10分鐘，小心轉(zhuǎn)移上清(含線粒體的部分)到4個新的離心管中。沉淀含細(xì)胞核和未裂解的細(xì)胞，可以棄之不用。如果要用于純化細(xì)胞核DNA，則可以放-80℃長期保留。
11. 將含上清液的4個離心管在4℃ 10000g離心20分鐘。
12. 每個離心管中加2.5mL預(yù)冷的溶液A工作液重懸線粒體沉淀并匯集(共約10mL)，此為線粒體粗提液。
13. 如果直接用線粒體粗提液提取線粒體DNA，容易有細(xì)胞核DNA污染。
 具體步驟是：在水平轉(zhuǎn)子離心機上4℃ 10000g離心7分鐘，小心棄上清，沉淀為線粒體，直接用于第三步的線粒體DNA提取。
14. 如果需要高純度、無污染的線粒體DNA，則需要用密度梯度離心法將完整的線粒體和其他細(xì)胞碎片進一步分離。具體見下步線粒體精提液的制備。

三：線粒體精提液的制備(密度梯度離心法)
15. 制備重液和輕液：將4.1克成分B干粉加到6.3mL溶液C中，充分搖晃混勻得10mL重液。將4.1克成分B干粉加到6.3mL去離子水中，充分搖晃混勻得10mL輕液。
16.在50mL塑料離心管中先加入10mL重液，再在其上輕輕加上10mL輕液，最后加上第11步所得的約10mL線粒體粗提液。
17. 加平衡離心管后在水平轉(zhuǎn)子冷凍超速離心機上4℃ 43000g離心2小時，重液和輕液間的帶為完整線粒體。
18. 用廣口吸管小心將線粒體轉(zhuǎn)移到新的離心管中，加入等倍體積的預(yù)冷的溶液C，輕柔混勻。取少量在相差顯微鏡下檢查線粒體完整性。
19.在水平轉(zhuǎn)子離心機上4℃ 19000 g離心20分鐘，小心將上清吸出后，線粒體沉淀可以直接用于DNA提取。

四：線粒體DNA提取
20. 將600μL通用線粒體DNA提取試劑盒溶液A加入到上步得到的線粒體沉淀中并吹打混勻，然后轉(zhuǎn)移到1.5mL離心管中。
21. 65℃放置5分鐘。
22. 加入300μL通用線粒體DNA提取試劑盒溶液B，震蕩混勻10-30秒。
 注意：溶液B非常粘稠，可以將其預(yù)熱到65℃并剪掉一截槍頭后再取。
23. 加入200μL自備的氯fǎng，震蕩混勻10-30秒。
24. 12000g室溫離心3分鐘。此時上清液將變得透明，中間層有白膜。
25.小心轉(zhuǎn)移上清液(約0.8mL)到一個新的1.5mL離心管中，避免觸及中間層的白膜，可留少量上清不取。
26. 加入1倍體積的通用線粒體DNA提取試劑盒溶液C，顛倒30次混勻。
27. 12000g室溫離心5分鐘，小心棄上清液。
28.在離心管中加入1mL自備的75%乙醇，震蕩30秒。
29. 12000g室溫離心1分鐘，小心棄上清液。
30. 12000g室溫離心半分鐘，殘留液體將匯集在管底。
31. 用洗液槍吸棄管底殘留液(約50μL)。
32. 加50-100μL自備的TE緩沖液，溶解DNA沉淀即得線粒體DNA溶液。直接取5-10μL電泳檢測，其余放直接使用或放-80℃冰箱備用。