植物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取試劑盒(酶法)

特別提示：包括植物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取試劑盒(酶法)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：植物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取試劑盒(酶法)
英文名稱：Plant endoplasmic reticulum protein extraction kit
產(chǎn)品貨號：HR8047
產(chǎn)品規(guī)格：50T|100T



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名稱：弱RIPA裂解液
貨號：BTN131008
規(guī)格：250mL
RIPA裂解液是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等實(shí)驗(yàn)。本產(chǎn)品裂解強(qiáng)度較強(qiáng)，對膜蛋白、胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白和各種轉(zhuǎn)錄因子均有很好的效果，本產(chǎn)品含有各種蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制劑，能有效防止各種蛋白酶對目的蛋白的降解。我公司各種RIPA裂解液產(chǎn)品特點(diǎn)見下表：

產(chǎn)品名稱	RIPA裂解液(強(qiáng))	RIPA裂解液(中)	RIPA裂解液(弱)
有效裂解成分	1% Triton X-100,1% deoxycholate,0.1% SDS	1% NP-40，0.5% deoxycholate,0.1% SDS	1% NP-40，0.25% deoxycholate
裂解強(qiáng)度	強(qiáng)	中	溫和
對膜蛋白的提取	很好	較好	一般
對胞漿蛋白的提取	很好	很好	很好
對核蛋白的提取	很好	較好	較好
胞漿磷酸化蛋白提取	很好	很好	很好
細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子提取	很好	很好	很好
含蛋白酶抑制劑	是	是	是
含磷酸酯酶抑制劑	是	是	是
主要用途	WB,IP	WB,IP	WB,IP,co-IP

儲存條件：低溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
1. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。
2. 裂解細(xì)胞
2.1 對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后，細(xì)胞就會被裂解。
2.2 對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管，然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000g離心3～5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意：通常6孔板每孔細(xì)胞加入150微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200微升或250微升。

對于組織樣品：
1. 把組織剪切成細(xì)小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。
3. 按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)
4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000～14000g離心3～5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
注意：RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正�，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如NF-kappaB、p53等時(shí)，通常不必進(jìn)行超聲處理，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。

備注：
1.為取得最佳的使用效果，盡量避免過多的反復(fù)凍融�？梢赃m當(dāng)分裝后使用。
2.裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。
3.用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品，建議使用BCA蛋白濃度測定試劑盒，不建議使用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。