鏈狀帶絳蟲熒光定量PCR試劑盒(探針法)

特別提示：包括鏈狀帶絳蟲熒光定量PCR試劑盒(探針法)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：鏈狀帶絳蟲熒光定量PCR試劑盒(探針法)
英文名稱：Taenia solium qPCR Kit(Probe Method)
產(chǎn)品貨號(hào)：BTN15-58820
產(chǎn)品規(guī)格：50次



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名稱：高致病性豬藍(lán)耳病病毒(hp-PRRSV)單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)：SYA409
規(guī)格：48次/盒|96次/盒

名稱：豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌(APP)單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)：SYA439
規(guī)格：48次/盒|96次/盒
本試劑盒適用于檢測(cè)氣管分泌物拭子、肺組織等樣本中傳染性胸膜肺炎放線桿菌(APP)DNA，用于傳染性胸膜肺炎放線桿菌的輔助診斷，其檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考。

本試劑盒用一對(duì)傳染性胸膜肺炎放線桿菌特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對(duì)豬傳染性胸膜炎放線桿菌核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

試劑盒組成：

組份	數(shù)量	規(guī)格
APP熒光qPCR反應(yīng)液(APP-qPCR MIX)	1管	720μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
陰性對(duì)照(NTC)	1管	50μL/管
陽性對(duì)照(APP-PTC)	1管	50μL/管

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期6個(gè)月。

使用方法：

一、樣品采集：
 樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照《牛傳染性胸膜肺炎病原分離鑒定》(SNT1376.1-2004)要求進(jìn)行。
?糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
?病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
 注：上述樣品建議經(jīng)過增菌后，收集培養(yǎng)物用于檢測(cè)。

二、DNA提�。�
 可按常規(guī)方法提取，也可采用商品化試劑盒提取DNA。
?培養(yǎng)物：取培養(yǎng)物50μL(培養(yǎng)至一定濁度)或者挑取單克隆菌落與50μLDNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
?糞便樣品：挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中，加入0.5mL生理鹽水，振蕩混勻，13000rpm離心3分鐘，棄上清，沉淀中加入50μLDNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
?其他液體標(biāo)本：取標(biāo)本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
 注：陽性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對(duì)照濃度較高，建議最后在樣品制備區(qū)域加入陽性對(duì)照。

三、檢測(cè)步驟：
1．試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光qPCR反應(yīng)液(APP-qPCR MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑	每個(gè)反應(yīng)加入的量	N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液	15μL	N×15μL

2．qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。推薦循環(huán)條件:

	1循環(huán)	50℃ for 2 min
預(yù)變性	1循環(huán)	95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增	40循環(huán)	95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec

在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM，淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

四、結(jié)果分析：
1．結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測(cè)結(jié)果�；�線和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的最高點(diǎn)為準(zhǔn)。
2．試驗(yàn)成立判定
?陰性對(duì)照(NTC)：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
?陽性對(duì)照(APP-PTC)：均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線。
?以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則，此次試驗(yàn)視為無效。
3．結(jié)果判定
?在試驗(yàn)成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明APP核酸陽性。
?Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明APP核酸陰性。
?如果35＜Ct值≤40，判為可疑樣品。對(duì)于可疑樣品，先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
?對(duì)于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進(jìn)行APP qPCR檢測(cè)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽性，表明APP核酸陽性；否則判為樣本陰性。

五、注意事項(xiàng)：
?初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書。并嚴(yán)格按照說明書步驟操作。
?所有使用的離心管應(yīng)高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
?PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等)，防止實(shí)驗(yàn)室污染。
?樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行，以免污染。
?試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

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