其它公司多糖多酚植物RNA提取試劑盒失敗原因和解決方案

很多植物RNA的樣品由于含有大量的多糖、多酚、代謝產(chǎn)物、色素等成分，造成RNA提取過程中氧化、褐化、降解、由于植物品種的多樣性造成情況更加復雜。手工的CTAB類的方法提取因為時間太長，太繁瑣，手工方法不在討論之列。一直以來沒有一款好的試劑盒包括qiagen、promega等進口試劑盒也無法滿足科研工作者對植物RNA提取的要求。

下面我們來分析一下植物RNA為什么不能提取成功的原因：

市面上最常見的RNA提取試劑盒無非是兩種：第一種：TRIzol改良類方法（包括溶液型的和離心柱型的）、第二種：直接裂解過柱子的方法（離心柱）

第一種試劑盒失敗的原因1：RNA市面上面最流行的方法就是Trizol，或者Triol改良，或者Trizol加離心柱一類的改良方法。trizol也就是異硫氰酸胍/苯酚/氯仿原理一步法的方法最適合的對象是動物源性的組織細胞，針對普通多糖多酚低的植物性的材料，TRIzol類原理產(chǎn)品也可以提取。但是多糖、多酚、次級代謝產(chǎn)物豐富的情況下，trizol類方法無法防止多糖多酚對于RNA/DNA分相的干擾，要么殘留大量DNA，要么殘留大量多糖、多酚或者次級代謝產(chǎn)物，氧化破壞RNA，或者殘留這些多糖多酚，色素代謝產(chǎn)物等抑制下游的反轉(zhuǎn)錄等反應。限于技術(shù)水平的限制，市面上絕大多數(shù)的國產(chǎn)廠家是使用trizol的方法進行改良，無論是不是加了離心柱。但是實踐證明，改良不能從根本上解決問題。判斷是否試劑盒使用這種改良的方法非常簡單：是否裂解液含有苯酚的味道和使用氯仿，如果使用到了氯仿就是TRIzol方法的改良。

第二種試劑盒失敗的原因：直接裂解過柱子的方法是目前最先進的方法，但是也是技術(shù)含量最高的方法。這個方法采用裂解液（不含苯酚，氯仿）直接裂解，RNA/DNA同時過柱子，然后在柱子上面直接分離RNA/DNA，所以，這種方法的優(yōu)點第一在于，避免了使用trizol在多糖多酚下不能成功分離RNA/DNA的弊端、第二在于，不使用有毒的苯酚氯仿。但是正是因為其技術(shù)先進，所以難度很高，國內(nèi)廠家包括進口公司有兩個技術(shù)難點一直沒有突破。第一，裂解液的成分必須針對去除多糖多酚進行研發(fā)添加去多糖多酚，代謝產(chǎn)物成分。否則會同樣碰到多糖多酚干擾提取的問題。第二、和trizol原理不同，直接過柱法DNA/RNA同時加到吸附柱上去。如何去除DNA是第一個難點。否則會殘留大量DNA。兩個技術(shù)難點的沒有掌握導致了國內(nèi)公司包括的第二種試劑盒失敗。國外公司因為沒有掌握第一難點，裂解液里面沒有去除多糖多酚成分，所以包括qiagen的盒子也常常不能成功提取植物RNA樣品。

本人領銜和研發(fā)團隊配合經(jīng)過3年的不斷研發(fā)改良，針對多糖多酚植物的特點，和這兩種試劑盒失敗的原因，開發(fā)出了EASYspin植物RNA快速提取試劑盒，第一采用直接過柱子方法，徹底拋棄了TRIZOL苯酚，氯仿原理方法，使用無毒原料，并且添加了有自主知識產(chǎn)權(quán)的去除多糖多酚成分解決了多糖多酚和代謝產(chǎn)物對于RNA的破壞和干擾分離。第二突破了直接過柱子的方法DNA去除的技術(shù)難點，解決了DNA殘留過多問題。經(jīng)過實踐過程中，幾十種國內(nèi)試劑盒提取失敗和進口試劑盒提取失敗的例子，使用我們開發(fā)的試劑盒提取，除了一例因為離心柱子堵塞導致失敗外，全部成功。而且，20分鐘提取步驟非常簡單，非常快速，無毒苯酚氯仿。全部提取成功的RNA可以成功完成下游反應試驗。

部分成功樣品：

棉花、海棠、黑加侖、煙草、擬南芥、虎杖、大豆、草莓、冬青、月季、薔薇、沙棘、冬棗、蘆薈、仙人掌、報春花、水稻、玉米、唐菖蒲、櫻桃、白玉蘭、毛白楊、櫻花、葡萄、百合花、紫菜、綠藻、香蕉、水仙花、青花菜、地被菊、蘋果、梅花、番茄、石斛、毛桃、苧麻等等，其中包括qiagen無法提取的黑加侖、冬青，promega無法提取的海棠等樣品、均可用該產(chǎn)品成功提取。

EASYspin 植物RNA快速提取試劑盒

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