棉花快速基因沉默（VIGS）

■ 技術(shù)簡介 病毒介導(dǎo)的基因沉默技術(shù)（VIGS）是一種適用于快速高通量研究和鑒定植物基因功能的新技術(shù),其原理是利用植物天然防御病毒的保衛(wèi)機制。當在植物病毒載體上裝入植物內(nèi)源的目的基因，并接種植物后，病毒在植物體內(nèi)產(chǎn)生系統(tǒng)性侵染，蔓延到全株，同時表達出該目的基因的雙鏈RNA（dsRNA）。這種dsRNA會觸發(fā)植物體內(nèi)RNAi機制，定向降解植物內(nèi)源的該目的基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生mRNA，導(dǎo)致該目的基因功能的下調(diào)或抑制，從而通過與植物表型變化的結(jié)合分析，了解該目的基因的功能。 此外，在植物病毒載體上裝入植物寄主（如昆蟲、真菌、細菌等）的關(guān)鍵基因序列，接種植物后會產(chǎn)生該序列的小RNA(siRNA)。寄主入侵植物后攝入的這些siRNA同樣在寄主體內(nèi)引發(fā)RNAi，下調(diào)或抑制寄主的關(guān)鍵基因，從而產(chǎn)生減少寄主危害，達到提高植物對寄主抗性的研究目的。 優(yōu)點： 1.VIGS技術(shù)在當代植株上直接產(chǎn)生RNAi效果，大幅節(jié)約時間和成本； 2.避免傳統(tǒng)轉(zhuǎn)基因體系的弊端，尤其適合轉(zhuǎn)化體系不成熟的植物； 3.VIGS技術(shù)可以同時實 現(xiàn)多個基因的沉默； 4.VIGS技術(shù)可以對缺失致死的基因進行表達下調(diào)研究； 5.VIGS技術(shù)可以同時沉默基因家族中的單個或多個基因，解決基因家族冗余性問題。 局限： 1.病毒載體適用的植物品種有所限制； 2.病毒載體一般不能完全抑制目標基因表達，可能影響表型變化的判斷； 3.病毒載體在不同植株內(nèi)和不同條件下引發(fā)的基因沉默效果可能存在差異。 ■ 適用研究 1.由于棉花轉(zhuǎn)化體系耗時很長（10-15個月），因此借助VIGS技術(shù)對基因進行快速沉默（約3個月），能夠在短期內(nèi)初步驗證基因功能，然后再進行穩(wěn)定轉(zhuǎn)化，可以加大研究把握度，增強目標方向性，提高資源利用率。 2.通過棉花介導(dǎo)的RANi機制對寄主害蟲、病原微生物抗性研究，尤其是對寄主害蟲、病原微生物在基因組水平上進行RNAi抗性靶點的高通量篩選。 3.可直接廣泛應(yīng)用于中棉系列、柯字棉系列等品種，尤其適合缺乏有效穩(wěn)定轉(zhuǎn)化體系的商品品種或特殊實驗品種。 4.已經(jīng)明確的棉花基因功能，需要在煙草、擬南芥、番茄等模式植物中擴大同源基因驗證，或者增加基因?qū)＠�保護范圍。 ■ 服務(wù)選項 為推廣VIGS研究技術(shù)，敝公司推出特惠酬賓活動，至2014年底8折優(yōu)惠！ 一、棉花內(nèi)源基因沉默 價格：8000元 特惠：6400元 周期：3個月 客戶提供：目標基因序列信息和PCR模板材料 服務(wù)內(nèi)容：1.PCR克隆目標基因片段 2.構(gòu)建TRV載體、農(nóng)桿菌接種棉花 3.VIGS棉花目標基因表型觀察與定量PCR分析表達水平（也可交付客戶自行觀察和分析） 二、棉花病蟲害RNAi抗性篩選 價格：10000元 特惠：8000元 周期：4個月 客戶提供：目標基因序列信息和PCR模板材料 服務(wù)內(nèi)容：1.PCR克隆目標基因片段 2.構(gòu)建TRV載體、農(nóng)桿菌接種棉花 3.VIGS棉花抗蟲或抗病性測試與定量PCR分析表達水平（也可交付客戶自行觀察和分析） 三、棉花外源基因表達 價格：議價 周期：4個月 客戶提供：目標基因序列信息和PCR模板材料 服務(wù)內(nèi)容：1.PCR克隆目標基因片段 2.構(gòu)建TRV載體、農(nóng)桿菌接種棉花 3.病毒侵染棉花觀察外源基因表型與定量PCR分析表達水平（也可交付客戶自行觀察和分析） ■ 服務(wù)說明 1.全年均可開展項目實驗； 2.采用的棉花病毒載體為煙草脆裂病毒（TRV），以目的基因沉默為主，也可用于較短基因的過表達； 3.所說的3-4個月周期是指載體構(gòu)建后至接種棉花形成植株系統(tǒng)性感染并表達插入的目的序列的時間，由于VIGS形成的基因沉默或過表達效果可能持續(xù)到開花、結(jié)實等整個生活史，因此根據(jù)表型觀察要求，實驗周期可能延長； 4.每1個月向客戶提供項目報告，包括： （1）進度描述 （2）載體構(gòu)建報告 （3）棉花接種圖片 （4）棉花對照表型圖片，VIGS棉花表型圖 （5）VIGS棉花目標基因定量PCR分析報告 5. 獲得的VIGS棉花可提供給客戶自行進行表型觀察和基因分析； 6. 簽訂合同并收取50%預(yù)付款后3日內(nèi)項目啟動，交付標的物后5日內(nèi)支付50%尾款，因客觀因素或技術(shù)風(fēng)險導(dǎo)致項目無法完成的，僅收取合同金額的30%作為成本補償，多余的預(yù)付款退還客戶； 7. 客戶可以對項目服務(wù)選項、交付標的提出個性化要求，雙方協(xié)商確定技術(shù)方案和費用。 公司網(wǎng)址：http://pro4fee6157.isitestar.cn